共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

J4 ›› 2010, Vol. 36 ›› Issue (1): 30-34.

共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

邵月婷¹, 刘亚男¹, 邵晨¹, 汲坤¹, 李晓洁¹, 李峰¹, 张灵¹, 赵丹¹, 李扬¹, 徐德启², 胡嘉弟³, 赵雪俭¹

(1．吉林大学基础医学院病理生理学教研室|吉林长春 130021；2．美国食品药品监督管理局|马里兰州 Bethesda 20892；3．美国马里兰大学医学院|马里兰州Baltimore 21201)

收稿日期:2009-08-16 出版日期:2010-01-28 发布日期:2010-01-28
通讯作者: 李扬 E-mail:(Tel:0431-85619485,E-mail:lyang@jlu.edu.cn)
作者简介:邵月婷(1978-)|女|吉林省梅河口市人|在读医学博士|主要从事肿瘤病理生理学研究。
基金资助:
教育部博士学科专项基金资助课题 (20070183012);吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(200705360)

Construction |of vectors encoding both wide type |p53 protein and siRNA-mdm2 and their |expressions in PC-3 cells

SHAO Yue-Ting¹, LIU Ya-Nan¹, SHAO Chen¹, JI Kun¹, LI Xiao-Jie¹, LI Feng¹, ZHANG Ling¹, DIAO Dan¹, LI Yang¹, XU De-Qi², HU Jia-Di³, ZHAO Xue-Jian¹

1.Department of Pathophyisiology,School of Basic Medical Sciences,Jilin Univer
sity,Changchun 130021,China;2. Food and Drug Administration,Bethesda 20892,USA;3. School of Medicine,University of Maryland,Baltimore 21201,USA)

Received:2009-08-16 Online:2010-01-28 Published:2010-01-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建可同时表达野生型p53 (wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法：利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞，半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对mdm2和p53表达的影响，MTT法检测共表达质粒转染后PC-3细胞增殖活性。结果：克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-mdm2序列，经DNA测序证实序列正确，通过连接成功构建上述真核重组表达载体；转染细胞48 h后可见siRNA-mdm2组GFP明显表达； RT-PCR和Western blotting检测显示转染共表达质粒后PC-3细胞中 wt-p53表达增强，mdm2表达下调；MTT检测显示共表达质粒转染后PC-3细胞生长抑制率为40.4%。结论：成功构建p53与siRNA-mdm2共表达质粒，共表达质粒可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖。

关键词: 基因, p53；mdm2基因；RNA干扰；前列腺肿瘤；质粒

Abstract:

Abstract:Objective
To construct the recombinant vectors that coexpress wild type p53(wt-p53) and siRNA-mdm2 for gene therapy in androgen independent prostate cancer .Methods The subcloning,T-Acloning,and PCR technique were used to construct the recombinant vectors,named pcDNA3.1-p53,siRNA-mdm2,p53/siRNA-mdm2, and siRNA-scramble .The recombinant expression vectors mentioned above were transfected into PC-3 cells,the expression levels of the mdm2 siRNA and p53 after transfection were detected by the semi-quantitative RT-PCR analysis and Western blotting analysis.MTT assay was used to detect the proliferation inhibition of PC-3 cells after transfection.Results The recombinant plasmids containing both wt-p53 and siRNA-mdm2 were successfully constructed,and confirmed by DNA sequence analysis.After transfected for 48 h, the expression of GFP was observed.The expression level of wt-p53 was increased,and the expression of mdm2 was decreased detected by RT-PCR and Western blotting.MTT assay showed that the inhibitory rate of proliferation of PC-3 cells was 40.4% after transfection.Conclusion The recombinant plasmids containing both wt-p53 and siRNA-mdm2 are successfully constructed,they can remarkablely inhibit the proliferation of PC-3 cells.

Key words: genes,p53；mdm2 gene；RNA interference；prostate cancer；plasmids

中图分类号:

邵月婷, 刘亚男, 邵晨, 汲坤, 李晓洁, 李峰, 张灵, 赵丹, 李扬, 徐德启, 胡嘉弟, 赵雪俭. 共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达[J]. J4, 2010, 36(1): 30-34.

SHAO Yue-Ting, LIU Ya-Nan, SHAO Chen, JI Kun, LI Xiao-Jie, LI Feng, ZHANG Ling, DIAO Dan, LI Yang, XU De-Qi, HU Jia-Di, ZHAO Xue-Jian. Construction |of vectors encoding both wide type |p53 protein and siRNA-mdm2 and their |expressions in PC-3 cells[J]. J4, 2010, 36(1): 30-34.

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