原代SD大鼠主动脉内皮细胞培养方法的建立及其鉴定

doi:10.13481/j.1671-587X.20210431

吉林大学学报(医学版) ›› 2021, Vol. 47 ›› Issue (4): 1038-1042.doi: 10.13481/j.1671-587X.20210431

原代SD大鼠主动脉内皮细胞培养方法的建立及其鉴定

唐元瑜¹(),刘海琴²,马华根³

^1.福建中医药大学中医学院中医基础理论教研室，福建福州 350122
^2.福建中医药大学中西医结合学院，福建福州 350122
^3.北京中医药大学中医学院金匱教研室，北京 100029

收稿日期:2020-11-25 出版日期:2021-07-28 发布日期:2021-07-22
通讯作者: 唐元瑜 E-mail:2422198977@qq.com
作者简介:唐元瑜（1971－），男，四川省攀枝花市人，副教授，医学博士，主要从事血管性疾病基础和临床方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81072714);福建省科技厅自然科学基金项目(2017J01545)

Establishment of cultural method of primary SD rat aortic endothelial cells and their identification

Yuanyu TANG¹(),Haiqin LIU²,Huagen MA³

^1.Teaching and Research Office of Basic Theory of Traditional Chinese Medicine，College of Traditional Chinese Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China
^2.College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China
^3.Teaching and Research Office of Jin Gui，College of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Received:2020-11-25 Online:2021-07-28 Published:2021-07-22
Contact: Yuanyu TANG E-mail:2422198977@qq.com

摘要/Abstract

摘要： 目的

建立一种简便高效的原代SD大鼠主动脉内皮细胞（AECs）培养方法，为探索AECs的分子生物学特性及开展心脑血管疾病研究提供重要的载体和工具细胞。

方法

取SD大鼠1只，无菌打开胸腹腔，分离出主动脉，剔除血管外结缔组织和脂肪，将主动脉内膜外翻，切成长为1.0~1.5 mm的血管段后接种于培养瓶中，7 d后去除血管段继续培养。通过细胞形态表现观察和第Ⅷ因子（FⅧ）相关抗原免疫细胞化学染色鉴定目的细胞。

结果

接种3 d后，有少量细胞从血管段周围迁移出，形成岛屿状细胞团；10~12 d后，细胞集落逐渐融合成片，铺满瓶底，呈典型的“铺路石样”镶嵌式排列。FⅧ相关抗原免疫细胞化学染色检测，细胞的胞核和胞质淡染成棕红色，表达为阳性，阳性细胞率达98%以上。

结论

主动脉内膜外翻切段贴壁培养法能够成功分离培养出原代大鼠AECs。

关键词: 主动脉, 血管内皮细胞, 内膜外翻切段贴壁培养法, 原代培养, 免疫细胞化学染色, 大鼠,SD

Abstract: Objective

To establish a simple and efficient cultivating method of the primary SD rat aortic endothelial cells（AECs），and to provide an important carrier and tool cells for the exploration of the molecular biologial characteristics of AECs and the study of cardiovascular and cerebrovascular diseases.

Methods

One SD rat was selected， the chest was opened， and the aorta was removed in sterile condition； the connective tissue and fat outside the blood vessel were removed；the aortic tunica intima was everted and the aorta were cut into 1.0－1.5 mm vascular segments，and the vascular segments were placed in a culture bottle for primary culture. Then the vascular segments were removed 7 d later. The cultured cells were identified by morphological observation and immunocytochemical staining of factor Ⅷ（FⅧ） related antigen.

Results

After 3 d of culture， a small number of cells migrated from the vascular segments to form the island cell mass. From the 10th to 12th days， the adherent cells covered most of the culture bottle surface， and presented a typical “paving stone” mosaic arrangement. The results of immunocytochemical staining of FⅧ showed that the nucleus and the cytoplasm were brownish red，and the expression was positive； the positive cell rate was more than 98%.

Conclusion

Adherent culture method of aortic intima valgus can successfully isolate and culture the primary rat AECs.

Key words: aorta, vascular endothelial cells, intima valgus adherent culture method primary culture, immunocytochemical staining, rats，SD

中图分类号:

R329.21

唐元瑜,刘海琴,马华根. 原代SD大鼠主动脉内皮细胞培养方法的建立及其鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(4): 1038-1042.

Yuanyu TANG,Haiqin LIU,Huagen MA. Establishment of cultural method of primary SD rat aortic endothelial cells and their identification[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2021, 47(4): 1038-1042.

图/表 2

参考文献 24

1	VOGHEL G， THORIN-TRESCASES N， MAMARBACHI A M， et al. Endogenous oxidative stress prevents telomerase-dependent immortalization of human endothelial cells［J］. Mech Ageing Dev， 2010， 131（5）： 354-363.
2	CATTANEO M G， VANETTI C， DECIMO I， et al. Sex-specific eNOS activity and function in human endothelial cells［J］. Sci Rep， 2017， 7（1）： 9612.
3	耿瑶，朱玲勤，刘法东，等. 高温高湿环境对自发性高血压大鼠胸主动脉细胞凋亡的影响［J］. 环境与健康杂志， 2017， 34（10）： 847-851.
4	王云开，苏海，程晓曙. 高压培养及卡托普利干预对猪离体主动脉内皮细胞功能的影响［J］. 中国病理生理杂志， 2002， 18（3）： 304-305.
5	韩锡萍，张鹏，于凡，等.高盐抑制胸主动脉内皮细胞一氧化氮生成及其机制［J］.中国药理学通报，2019，35（9）：1251-1256.
6	伍诚麟，郭嘉馨，杨佳丽，等. 高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态及刚度的影响［J］. 医用生物力学， 2020， 35（4）： 449-454.
7	BOUABDALLAH J， ZIBARA K， ISSA H，et al. Endothelial cells exposed to phosphate and indoxyl sulphate promote vascular calcification through inter leukin-8 secretion［J］. Nephrol Dial Transplant，2019，34（7）：1125-1134．
8	JALKANEN J， KOTIMÄKI M， HUHTANIEMI I， et al. Novel epididymal protease inhibitors with Kazal or WAP family domain［J］. Biochem Biophys Res Commun， 2006， 349（1）： 245-254.
9	KOBAYASHI M， INOUE K， WARABI E， et al. A simple method of isolating mouse aortic endothelial cells［J］. J Atheroscler Thromb， 2005， 12（3）： 138-142.
10	曹阳，张军平，彭立，等. 兔主动脉内皮细胞的分离培养及生物学特性［J］. 中国组织工程研究， 2021， 25（19）： 3000-3003.
11	刘彦，陈绍良，徐祖玲，等. 大鼠主动脉内皮细胞的分离培养和鉴定［J］. 现代生物医学进展，2014，14（5）：834-836.
12	侯伟，魏红玉，罗彦彦，等.大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定［J］.广西医科大学学报，2014，31（4）：556-559.
13	苗新宇，朱潇潇，龚燕平，等. 原代大鼠主动脉内皮细胞衰老模型的建立［J］. 细胞与分子免疫学杂志， 2019， 35（3）： 230-235.
14	林翠红，刘光辉，杨田野，等. 大鼠主动脉内皮细胞改良型分离培养方法［J］. 西安交通大学学报（医学版）， 2018， 39（6）： 911-916.
15	OH J， LEE J， WOO J M， et al. Systematic identification and integrative analysis of novel genes expressed specifically or predominantly in mouse epididymis［J］. BMC Genomics， 2006， 7： 314.
16	谭培艺，高卫真，康毅，等. 机械刮取法体外培养牛胸主动脉内皮细胞［J］. 天津医科大学学报，2010，16（2）： 198-200.
17	武磊，周学思，杲修杰，等.离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价［J］.中国应用生理学杂志，2016，32（5）：390-394，482.
18	潘礼龙，戴敏，王伟. 大鼠主动脉内皮细胞原代培养的研究［J］. 中国药理学通报， 2007， 23（3）： 410-413.
19	杨翠燕，王金凤，张艳萍，等.大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离培养和纯化鉴定［J］.解放军医学杂志，2010，35（2）：195-196，200.
20	何珂帅，章辉，张俊杰，等. 人主动脉内皮细胞体外培养方法的建立及生物学活性鉴定［J］. 南京医科大学学报（自然科学版）， 2018， 38（6）： 734-738.
21	季政，郭航远，池菊芳，等. 一种大鼠主动脉内皮细胞分离培养的改良方法［J］. 医学研究杂志， 2012， 41（9）： 67-71.
22	宋明宝，黄岚，于学军，等.随机贴块法培养大鼠主动脉内皮细胞及其鉴定［J］.重庆医学，2007，36（21）：2177-2178.
23	CHEN S F， FEI X， LI S H. A new simple method for isolation of Microvascular endothelial cells avoiding both chemical and mechanical injuries［J］. Microvasc Res，1995，50（1）：119-128.
24	SUH S H， VENNEKENS R， MANOLOPOULOS V G，et al. Characterisation of explanted endothelial cells from mouse aorta： electrophysiology and Ca²⁺ signalling［J］. Pflugers Arch， 1999， 438（5）： 612-620.

[1]	高逸璇,汪鹏,张思龙,高瑞娟,马莹芳,张可可,冯丹,黄宗奇,马克涛,李丽,司军强. 藏红花醛对体外高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转变的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(4): 948-957.
[2]	金朝龙,史学功,张成鑫,梁有峰,肖洁,盛哲,张定欣. 超声心动图在经心尖途径经导管主动脉瓣置换术后早期疗效评价中的应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(1): 228-237.
[3]	张莉,张梦圆,夏彬凤,孔敏,王茹,黄慧慧,尹霞. 脂蛋白a与钙化性主动脉瓣狭窄发生发展的关系及高脂蛋白a血症相关治疗的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(6): 1763-1772.
[4]	闫岩,郭锋,杨四宝,石少敏. TTE联合TEE诊断主动脉瓣二瓣畸形致二尖瓣前叶瘤1例报告及文献复习[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(5): 1426-1431.
[5]	杨永净,柯天洋,刘士新,王雪,许德权,刘婷婷,赵玲. 甲磺酸阿帕替尼联合放疗对肝癌HepG2细胞的体外协同增敏作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(4): 1009-1015.
[6]	贾远航,江义霞,何振华,陈林,周芳. SENP-1/HIF-1α通路对慢性间歇性低氧诱导大鼠血管内皮损伤的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(4): 1026-1034.
[7]	王琳茹,张晶,赵冬婵,王晋军,胡文贤. 沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(2): 431-441.
[8]	全宇璐,张萍萍,罗艳,霍竞,余小平,孙艳美,李亚丽. 嵌合型Y染色体等臂双着丝粒致胎儿主动脉狭窄1例报告及文献复习[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(1): 260-264.
[9]	薛筱蕾,胥保梅. Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(6): 1528-1538.
[10]	朱文豪,刘天一,何川,张晓宇,辛强,王海峰. 胎鼠神经干细胞原代培养及传代条件优化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(6): 1642-1648.
[11]	顾明,田加坤,赵亚男,孙键,张京晓,宋德彪. ECMO联合IABP治疗心源性休克过程中膜肺水肿导致低氧血症1例报告及文献复习[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(6): 1599-1604.
[12]	阮婷玉,史唯地,马勋,王静,康立超,杜冬冬,殷月兰. NDRG1干扰载体的构建及稳定过表达NDRG1人脑微血管内皮细胞的建立[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(6): 1614-1622.
[13]	武兵兵,张爱平,赵信科,李应东,刘凯. 当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(5): 1139-1147.
[14]	李妍,侯月,牟星蔚,刘冰清,万红,刘畅,夏薇. 北五味子在胸主动脉瘤发生发展中作用机制的网络药理学和分子对接技术分析[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 414-425.
[15]	李雪洋, 尹硕, 谢金芳, 李晶, 胡雪, 耿文韬, 张颖丽. 促红细胞生成素对大鼠即刻再植牙牙髓血运重建的促进作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(01): 56-60.

原代SD大鼠主动脉内皮细胞培养方法的建立及其鉴定

Establishment of cultural method of primary SD rat aortic endothelial cells and their identification

RichHTML

PDF (PC)

赞

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表 2

参考文献 24

相关文章 15

Metrics

本文评价

推荐阅读 10