双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

吉林大学学报(理学版)

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

张耀方1,2, 马百成1, 屠培培1, 李宠1, 马志华1, 姬艳丽1, 董震1,马超1, 郝军凤1, 李晓丹1, 王宇1, 李明刚1

1. 南开大学生命科学学院, 分子生物学研究所, 生物活性材料教育部重点实验室, 天津 300071;2. 天津农学院, 天津 300384

收稿日期:2013-02-23 出版日期:2014-01-26 发布日期:2014-03-05
通讯作者: 李明刚 E-mail:mgl@nankai.edu.cn

onstruction and Function Analysis ofDualfunctional Peptide (5rolGLP-HV)

ZHANG Yaofang^1,2, MA Baicheng¹, TU Peipei¹, LI Chong¹, MA Zhihua¹, JI Yanli¹,DONG Zhen¹, MA Chao¹, HAO Junfeng¹, LI Xiaodan¹, WANG Yu¹, LI Minggang¹

1. College of Life Science, Institute for Molecular Biology, The Key Laboratory for Bioactivematreialof Ministry of Education, Nankai University, Tianjin 300071, China;2. Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China

Received:2013-02-23 Online:2014-01-26 Published:2014-03-05
Contact: LI Minggang E-mail:mgl@nankai.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽（rolGLP-1）和水蛭素（rHV）融合基因促胰岛素水蛭素（5rolGLP-HV）, 并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 实现了高效表达. 表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA]亲和层析柱纯化, 得到高纯度的5rolGLP-HV. 用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析, 结果表明, 5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.

关键词: 糖尿病, 血栓, 促胰岛素水蛭素, 表达, 纯化, 功能分析

Abstract:

We constructed a fusion gene consisted of five copies longacting Glucagonlike peptide1 (rolGLP-1) and Hirudin (rHV) called 5rolGLP-HV by molecular cloning. 5rolGLP=HV gene was cloned into the expression vector pET22b (+) and translated into BL21 (DE3), and a highly expression bacterial strain was obtained. The expression product 5rolGLPHV was analyzed by SDS-PAGE electrophoresis and Western bolt, and was purified with NiNTA. Function analysis was performed via STZinduced type Ⅱ diabetic mice and thrombosis mice. The results show 5rolGLPHV has reducing blood glucose and antithrombotic effects.

Key words: diabetes mellitus, thrombosis, 5rolGLPHV; expression, purification, function analysis

中图分类号:

Q189

张耀方, 马百成, 屠培培, 李宠, 马志华, 姬艳丽, 董震,马超, 郝军凤, 李晓丹, 王宇, 李明刚. 双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析[J]. 吉林大学学报(理学版), 2014, 52(01): 131-136.

ZHANG Yaofang, MA Baicheng, TU Peipei, LI Chong, MA Zhihua, JI Yanli,DONG Zhen, MA Chao, HAO Junfeng, LI Xiaodan, WANG Yu, LI Minggang. onstruction and Function Analysis ofDualfunctional Peptide (5rolGLP-HV)[J]. Journal of Jilin University Science Edition, 2014, 52(01): 131-136.

[1]	刘桂霞, 曹心恬, 赵贺. 基于特征图网络和多种生物信息预测关键蛋白质的深度学习框架[J]. 吉林大学学报(理学版), 2024, 62(3): 593-605.
[2]	高雨晴, 董钢印, 张洪瑞, 马占山, 方丽, 詹冬玲. 麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征[J]. 吉林大学学报(理学版), 2024, 62(3): 742-749.
[3]	温舒然, 马占山, 詹冬玲. 灵芝三萜提取工艺的优化[J]. 吉林大学学报(理学版), 2024, 62(2): 452-0463.
[4]	刘欣岚, 叶姿妤, 鲁艳, 侯怡铃, 周丽倩, 蒲帝宏, 丁祥. 转录组分析sgf73基因缺失对粟酒裂殖酵母生长代谢影响的分子机制[J]. 吉林大学学报(理学版), 2023, 61(2): 426-436.
[5]	陈文龙, 张阳阳, 张生英, 邢小勇, 胡永浩. 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、表达及多克隆抗体制备[J]. 吉林大学学报(理学版), 2020, 58(3): 711-717.
[6]	车环宇, 赵凌志, 孙连双, 董洪坤, 滕国生. 刺五加根茎活性成分对蛋白酪氨酸磷酸酶1B的抑制作用[J]. 吉林大学学报(理学版), 2019, 57(2): 438-444.
[7]	李庆杰, 包海鹰, 图力古尔, 李玉. 粗毛纤孔菌的化学成分及抗炎活性[J]. 吉林大学学报(理学版), 2019, 57(1): 177-181.
[8]	董雪, 徐雨昕, 郭晶, 龚忠阔, 夏霖亚, 殷玉和, 吴丛梅. 重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 吉林大学学报(理学版), 2019, 57(06): 1538-1543.
[9]	史晶莹, 郭晶, 李雪, 董雪, 孙博, 吴丛梅, 殷玉和. 抗人PD-L1单克隆抗体的瞬转表达[J]. 吉林大学学报(理学版), 2018, 56(4): 1024-1028.
[10]	金浩, 付璐, 史晶莹, 吴丛梅, 吴慧, 殷玉和. 重组诺如病毒P颗粒的表达纯化及免疫原性[J]. 吉林大学学报(理学版), 2017, 55(04): 1025-1030.
[11]	隋春红, 徐亚维, 闫岗林, 李强, 安英, 王程. 具有GPx和SOD双酶活性含硒76肽的制备及其穿膜效应[J]. 吉林大学学报(理学版), 2017, 55(01): 168-174.
[12]	夏雪飞, 韩啸, 兰天姝, 王礼华, 吴佳楠, 周柚. 基于灰值区间的微阵列模拟数据生成算法[J]. 吉林大学学报(理学版), 2016, 54(06): 1401-1404.
[13]	王立成, 张鹏, 徐佳, 刘雨婷, 金萍,王琪菲, 修志明, 张越, 王丽萍. 药食同源植物醛糖还原酶抑制剂的筛选[J]. 吉林大学学报(理学版), 2016, 54(03): 652-656.
[14]	刘回民, 陈方奇, 郑明珠, 程国栋, 詹冬玲, 刘景圣. 玉米半胱氨酸蛋白酶的原核表达及酶学性质表征[J]. 吉林大学学报(理学版), 2015, 53(05): 1054-1059.
[15]	吴瑞红, 吕学强, 李卓, 舒燕. 问答社区问句中多字词表达提取[J]. 吉林大学学报(理学版), 2014, 52(06): 1230-1238.