敲低NIPBL基因通过Shh信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20260507

吉林大学学报(医学版) ›› 2026, Vol. 52 ›› Issue (5): 1252-1262.doi: 10.13481/j.1671-587X.20260507

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敲低NIPBL基因通过Shh信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

安玉琴^1,²,曹宁³,孔凡超³,张惠荣³()

^1.石河子大学医学院国家卫健委中亚高发病防治重点实验室, 新疆石河子 832000
^2.新疆维吾尔自治区石河子市人民医院儿科, 新疆石河子 832000
^3.石河子大学第一附属医院儿科, 新疆石河子 832000

收稿日期:2025-12-03 接受日期:2026-01-11 出版日期:2026-09-28 发布日期:2026-10-15
通讯作者: 张惠荣 E-mail:zhr331619@sina.com
作者简介:安玉琴（1984-），女，新疆维吾尔自治区石河子市人，副主任医师，在读硕士研究生，主要从事Cornelia de Lange综合征发病机制方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81660260)

Effect of knockdown of NIPBL gene on osteogenic differentiation of mouse bone marrow mesenchymal stem cells through Shh signaling pathway

Yuqin AN^1,²,Ning CAO³,Fanchao KONG³,Huirong ZHANG³()

^1.National Health Commission Key Laboratory of Prevention and Treatment of Central Asia High Incidence Diseases，School of Medicine，Shihezi University，Shihezi 832000，China
^2.Department of Pediatrics，People’s Hospital，Shihezi City，Shihezi 832000，China
^3.Department of Pediatrics，First Affiliated Hospital，Shihezi University，Shihezi 832000，China

Received:2025-12-03 Accepted:2026-01-11 Online:2026-09-28 Published:2026-10-15
Contact: Huirong ZHANG E-mail:zhr331619@sina.com

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨敲低NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的影响，阐明其通过音猬因子（Shh）信号通路发挥作用的机制。方法分离培养C57小鼠第3代BMSCs，采用流式细胞术鉴定细胞表面标志物表达情况。采用携带绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒转染构建NIPBL基因敲低的BMSCs模型，分为对照组（常规培养）、sh-NC组（转染Scramble shRNA空载慢病毒）和sh-NIPBL组（转染NIPBL shRNA慢病毒）。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BMSCs中NIPBL mRNA表达水平。对各组BMSCs进行成骨诱导培养，动态观察细胞形态变化，于成骨诱导后第7、14和21天收集细胞，采用Western blotting法检测各组细胞中Shh信号通路分子Shh、patched同源蛋白1（PTCH1）和胶质瘤相关癌基因同源蛋白1（GLI1）及成骨标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和Ⅰ型胶原蛋白α1链（COL1A1）蛋白表达水平。于诱导后第21天采用茜素红染色法评估各组BMSCs矿化能力。结果第3代BMSCs生长状态良好，呈长梭形或纺锤形，且呈现典型的CD105?CD45?表型。sh-NIPBL组和sh-NC组小鼠BMSCs中GFP稳定表达率高于90%，对照组小鼠BMSCs中未观察到荧光信号。与对照组比较，sh-NIPBL组小鼠BMSCs中NIPBL mRNA表达水平明显降低（P<0.001），表明NIPBL稳定敲低的BMSCs模型成功构建。成骨诱导后第21天，对照组小鼠BMSCs中布满致密矿化结节；sh-NIPBL组细胞中仅见少量、散在的微小矿化结节，分布稀疏且不融合，提示该组细胞向成骨细胞分化滞后。成骨诱导后第21天，与sh-NC组比较，sh-NIPBL组小鼠BMSCs中Shh、PTCH1、GLI1、COL1A1、ALP和OCN蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。成骨诱导后第7、14和21天，sh-NIPBL组小鼠BMSCs中上述蛋白表达水平始终低于对照组和sh-NC组。茜素红染色，对照组和sh-NC组BMSCs中可见大量密集、融合成片的橙红色矿化结节，sh-NIPBL组BMSCs中仅见少量散在的橙红色斑点。与对照组比较，sh-NIPBL组细胞矿化能力明显降低（P<0.01）。结论敲低NIPBL基因可导致小鼠BMSCs成骨和矿化能力降低，其作用机制与抑制Shh信号通路活性和下调成骨相关蛋白表达有关。

关键词: NIPBL基因, 骨髓间充质干细胞, 音猬因子信号通路, 成骨分化, Cornelia de Lange综合征

Abstract:

Objective To investigate the effect of the NIPBL gene knockdown on osteogenic differentiation of the mouse bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs）， and to elucidate the underlying mechanism through the sonic hedgehog （Shh） signaling pathway. Methods The BMSCs isolated from C57 mice were cultured in vitro to the third generation. Flow cytometry was used to identify the expressions of cell surface markers on the BMSCs. Lentivirus carrying green fluorescence protein （GFP） was used to construct the BMSC model with stable NIPBL knockdown. The cells were divided into control group（routine culture）， sh-NC group （transfected with Scramble shRNA lentivirus）， and sh-NIPBL group（transfected with NIPBL shRNA lentivirus）. Real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method was used to detect the expression levels of NIPBL mRNA in the BMSCs in various groups. The BMSCs in various groups were subjected to osteogenic induction， and the morphological changes were dynamically observed. The cells were collected on days 7， 14， and 21 after induction. Western blotting method was used to detect the expression levels of Shh signaling pathway proteins， including Shh， patched homolog 1 （PTCH1）， and glioma-associated oncogene homolog 1 （GLI1）， as well as osteogenic markers， including alkaline phosphatase （ALP）， osteocalcin （OCN）， and collagen type Ⅰ alpha 1 chain （COL1A1） proteins in the cells in various groups. Alizarin red staining was used to assess the mineralization capacities of the BMSCs in various groups on day 21 after induction. Results Third-generation BMSCs exhibited good growth status， showing a long-spindle or fusiform morphology and the typical CD105?CD45? phenotype. The stable GFP expression rates in the BMSCs of the mice in sh-NIPBL group and sh-NC group exceeded 90%， while no fluorescence signal was observed in control group. Compared with control group， the expression level of NIPBL mRNA in the BMSCs in sh-NIPBL group was significantly decreased （P<0.001）， indicating successful establishment of the NIPBL-knockdown model. On day 21 after osteogenic induction， dense mineralized nodules were observed in control group， while only a small number of scattered， tiny， sparse， and non-fused mineralized nodules were seen in sh-NIPBL group， suggesting delayed osteogenic differentiation. On day 21 after induction， compared with sh-NC group， the expression levels of Shh， PTCH1， GLI1， COL1A1， ALP， and OCN proteins in the BMSCs in sh-NIPBL group were significantly decreased （P<0.05）. On days 7， 14， and 21 after induction， the expression levels of aforementioned proteins in the BMSCs in sh-NIPBL group were consistently lower than those in control group and sh-NC group. The Alizarin red staining results showed a large number of dense， fused orange-red mineralized nodules in the BMSCs in control group and sh-NC group， while only scattered orange-red spots in the BMSCs were observed in sh-NIPBL group. Compared with control group， the mineralization capacity of cells in sh-NIPBL group was significantly decreased （P<0.01）. Conclusion Knockdown of the NIPBL gene may reduce the osteogenic differentiation capacity and mineralization capacity of mouse BMSCs， and its mechanism is related to inhibiting the activity of the Shh signaling pathway and downregulating the expression of osteogenesis-related proteins.

Key words: NIPBL gene, Bone marrow mesenchymal stem cells, Sonic hedgehog signaling pathway, Osteogenic differentiation, Cornelia de Lange syndrome

中图分类号:

R722

安玉琴,曹宁,孔凡超,张惠荣. 敲低NIPBL基因通过Shh信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2026, 52(5): 1252-1262.

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图/表 10

表1

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参考文献 26

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敲低NIPBL基因通过Shh信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

Effect of knockdown of NIPBL gene on osteogenic differentiation of mouse bone marrow mesenchymal stem cells through Shh signaling pathway

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