Islet-1基因逆转录病毒表达载体的构建

doi:教育部高等学校博士学科点专项科研基金(200

Islet-1基因逆转录病毒表达载体的构建

刘佳梅¹，陈东²，孟晓婷¹

1.吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室，吉林长春 130021；2.广东医学院组织学与胚胎学教研室，广东湛江 523808

收稿日期:2006-01-10 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-09-28 发布日期:2007-09-28
通讯作者: 陈东

Construction of recombinant retroviral vector with rat Islet-1 gene

LIU Jia-mei¹，CHEN Dong², MENG Xiao-ting¹

1. Department of Histology and Embryology, School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, China;2. Department of Histology and Embryology, Guangdong Medical College, Dongguan 523808, China

Received:2006-01-10 Revised:1900-01-01 Online:2007-09-28 Published:2007-09-28
Contact: CHEN Dong

摘要/Abstract

摘要： 目的：分离大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1（Islet-1）基因，构建plEGFP-C1-Islet-1逆转录病毒表达载体。方法：利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因，克隆到测序载体PGET-1 TA 中，测序后再亚克隆到逆转录病毒载体plEGFP-C1中，通过脂质体2000将其导入包装细胞PA317中，经G418筛选后，获得阳性克隆。结果：RT-PCR产物为1 050 bp条带，经测序鉴定与GenBank中Islet-1基因的序列相同；构建的plEGFP-C1-Islet-1载体经酶切鉴定，证实Islet-1基因片段正确插入逆转录表达载体中。用共聚焦激光扫描显微镜观察导入Islet-1基因的PA317细胞，可见细胞发出绿色荧光。结论：分离得到了大鼠Islet-1基因并成功构建了plEGFP-C1-Islet-1表达载体。

关键词: 克隆, 重组逆转录病毒载体

Abstract: Objective To isolate the rat insulin gene enhancer binding protein 1(Islet-1) gene and construct plEGFP-C1-Islet-1 recombinant retroviral expression vector. Methods The cDNA encoding the rat Islet-1 gene was isolated by RT-PCR method, the cDNA was first cloned into PGET-1 TA vector to facilitate the sequence and then subcloned into the retroviral vector plEGFP-C1. plEGFP-C1-Islet-1 was transfected into PA317 packaging cells with lipofectamine 2000. Transformants were selected in medium containing G418. Results A 1 050 bp DNA fragment was obtained by RT-PCR; plEGFP-C1-Islet-1 recombinant retroviral expression vector was identified by restrictive enzymes digestion, PA317 cells transfected with recombinant vector expressed enhancer green fluorescent protein (EGFP). Conclusion The gene encoding the rat Islet-1 is obtained and plEGFP-C1-Islet-1 expression vector is constructed successfully.

Key words: clone, recombinant retroviral expression vector

中图分类号:

Q782

刘佳梅，陈东，孟晓婷. Islet-1基因逆转录病毒表达载体的构建[J]. J4, 2007, 33(5): 831-833.

LIU Jia-mei，CHEN Dong, MENG Xiao-ting. Construction of recombinant retroviral vector with rat Islet-1 gene[J]. J4, 2007, 33(5): 831-833.

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