吉林大学学报(医学版) 2013, 39(1) 74-77 DOI: 10.7694/jldxyxb20130118    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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基础研究
大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析
刘朋飞1，黄秀英2，董 超1，冯业童1，吴昊昱1，刘 迪1，吴 璇1，周余来1，孙 波1,3  
1.  吉林大学药学院生物工程试验中心，吉林 长春 130021；2.吉林大学第一医院第二
手术室，吉林 长春 130021；3.吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室，吉林 长春13
0021  
摘要：目的：建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法，分析所获得细胞的增殖活力，为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法：采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段，并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管，常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养，待细胞爬出后，用免疫组织化学方法检测细胞角质素-18（CK-18）的表达情况，采用流式细胞术对第0、1和2（P0、P1、P2）代细胞的CK-18表达情况进行分析，用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力。结果：肾小管节段培养24 h后，可见细胞从节段内爬出；培养72 h后，细胞呈铺路石样密集生长。随着传代进行，P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9%、91.5%和76.8%，肾小管上皮细胞逐渐死亡，P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P<0.05)，同时培养体系中杂细胞增多。结论：该方法经济可靠、简便易行，但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次，不能长期培养，仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用。
关键词： 肾小管上皮细胞 分离 鉴定 增殖活力
收稿日期  2012-03-28   修回日期    网络版发布日期  2013-01-30  
DOI: 10.7694/jldxyxb20130118
基金项目:

吉林省卫生厅科技基金资助课题（2009Z043）；
吉林大学2010年博士研究生交叉学科科研计划项目资助课题（2010771015）
通讯作者: 周余来（Tel：0431-85619299，E-mail：zhouyl@jlu.edu.cn）； 孙 波（Tel：0431-85619702，E-mail：sunbo@jlu.edu.cn）
作者简介: 刘朋飞（1987-），男，吉林省长春市人，在读生物医学工程硕士，主要从事 肾脏疾病相关研究。
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