吉林大学学报(医学版) 2014, 40(03) 465-470 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140301    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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基础研究
FGFR3真核表达载体的构建及其在人白血病细胞系K562中的表达
许会静1,2，杜彤华3，孙艳3，李校堃1，肖业臣1
(1.吉林大学基础医学院生物化学教研室，吉林 长春 130021；2.吉林医药学院检验学院临床生物化学检验教研室，吉林 吉林 132013；3.吉林大学第二医院肿瘤血液内科，吉林 长春 130041）
摘要：

目的：构建成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）真核表达载体MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN，并检测FGFR3蛋白在人白血病细胞系K562中的表达。方法:通过PCR法获得FGFR3全长基因（fgfr3-WT）和截短失活型的FGFR3（fgfr3-DN），经双酶切后与真核表达载体MSCV/puro连接，构建MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后，脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中，经puromycin抗性筛选后，Western blotting法和流式细胞术检测细胞中FGFR3蛋白的表达。结果：PCR法鉴定MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组质粒，2个质粒分别扩增出2　400 bp的fgfr3-WT全长基因片段和1　200 bp的fgfr3-DN截短型片段,表明成功扩增fgfr3-WT全长基因和1　200 bp的fgfr3-DN基因；双酶切MS
CV/puro-fgfr3-WT重组质粒，获得2　400 bp的目的基因片段；测序显示，fgfr3-WT片段大小为2　400 bp,Blast对比分析表明测序结果与GenBank中的FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致,表明成功构建野生型FGFR3和突变失活型FGFR3真核表达载体；Western blotting 检测，与对照组（K562-MSCV）比较，MSCV/puro-fgfr3-WT转染组（K562-WT）FGFR3蛋白表达水平增加，表达水平是对照组的10倍以上；MSCV/puro-fgfr3-DN转染组（K562-DN）的截短型的FGFR3（K562-DN）高表达，而对照组和K562-WT转染组则无此片段；流式细胞术检测，K562-WT组有57.5%的细胞高表达FGFR3，K562-DN组有41.5%的细胞高表达FGFR3-DN。结论：成功构建高表达野生型和突变型FGFR3的人白血病细胞系K562。
关键词： 受体 成纤维细胞生长因子 3型 真核表达载体 K562细胞系 基因转染 白血病 粒-单核细胞 慢性
收稿日期  2013-09-04   修回日期    网络版发布日期  2014-05-28  
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140301
基金项目:

国家自然科学基金资助课题（81370640）；吉林省科技厅重点科技攻关项目资助课题（20130206003YY）；吉林省科技厅医药产业发展专项资金资助课题（20130727041YY）
通讯作者: 肖业臣
作者简介: 许会静（1985-），女，河北省保定市人，在读理学硕士，主要从事白血病的基础研究。
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