吉林大学学报(医学版) 2014, 40(03) 583-587 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140324    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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基础研究
EMMPRIN糖基化突变质粒的构建及功能检测
赵超悦1，宋润敏2，秦晖2，王娜2，杨柳1，李江1
1.吉林大学口腔医院口腔修复科，吉林 长春130021；2.东北师范大学生命科学学院膜通道实验室，吉林 长春 130024
摘要：

目的：构建细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)糖基化位点突变质粒，探讨其与肿瘤细胞增殖的关系。方法：利用PCR定点诱变技术构建EMMPRIN糖基化位点突变质粒。突变成功后，对突变质粒进行功能检测，Western blotting 法检测EMMPRIN蛋白表达；免疫荧光法检测细胞形态学变化；MTT法检测突变质粒与肿瘤细胞增殖的关系。结果：酶切鉴定和测序证实，将EMMPRIN序列中第44、152和186位的天冬酰胺突变成谷氨酰胺，成功构建EMMPRIN/GFP(N44Q)、EMMPRIN/GFP(N152Q)和EMMPRIN/GFP(N186Q)糖基化单点突变质粒；糖基化位点突变后，突变型细胞核分裂相显著减少，伪足数减少；MTT法检测，与对照组比较，野生型组细胞存活率明显升高（P<0.05）；而EMMPRIN糖基化位点突变后，与野生型比较，EMMPRIN（N44Q）、EMMPRIN（N152Q）和EMMPRIN（N186Q）细胞存活率均明显降低（P<0.05）。结论：EMMPRIN突变型能抑制肿瘤细胞的增殖，且随作用时间增加，抑制作用减弱；EMMPRIN糖基化修饰与肿瘤细胞的增殖有关联。
关键词： 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 点突变 糖基化 细胞增殖
收稿日期  2013-12-23   修回日期    网络版发布日期  2014-06-05  
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140324
基金项目:

吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(YYZX201241)；吉林省科技厅自然科学基金资助课题(201115106)；吉林省长春市科技局科研基金资助课题(2011122)
通讯作者: 李 江(Tel:0431-88796018,E-mail:ljiang@jlu.edu.cn)
作者简介: 赵超悦（1987-），女，黑龙江省克山县人，医学硕士，主要从事口腔修复学的基础与临床研究。
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