吉林大学学报(医学版) 2019, 45(04) 801-806 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190410    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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基础研究
人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响
代娟娟1, 杨丽娟1, 杜静1, 苗双1, 席思川1, 李晨2, 武艳1
1. 滨州医学院附属医院肿瘤研究实验室, 山东 滨州 256603;
2. 滨州医学院附属医院代谢与神经精神疾病研究所, 山东 滨州 256603
摘要：目的：检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响，阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法：通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA（LncRNA）MIR31HG全长序列，分子克隆至pcDNA3.1（-）真核表达载体，将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系（PC9-pcDNA3.1-MIR31HG，稳定转染组）和对照细胞系（PC9-pcDNA3.1，空载体组）。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平，采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果：琼脂糖凝胶电泳，成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段；MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测，稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组（P<0.05）。CCK-8检测，在培养24、36和48h时，稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组（P<0.01）。划痕愈合实验，在培养48h时，稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组（P<0.05）。结论：成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系，且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。
关键词： 长链非编码RNA MIR31HG PC9细胞 细胞增殖 细胞迁移
收稿日期  2018-09-26   修回日期    网络版发布日期  2019-08-02  
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190410
基金项目: 山东省科技厅科学基金资助课题（ZR2017PH028，ZR2014HQ080，ZR2016HM57）；滨州医学院科研计划与科研启动基金资助课题（BY2015KJ10）；山东省滨州市科技局科技发展计划资助课题（2015ZC0314）
通讯作者: 武艳,讲师(Tel:0543-3258276,E-mail:wuyan55@126.com);杨丽娟,副教授,硕士研究生导师(Tel:0543-3258276,E-mail:yljlw@163.com)
作者简介: 代娟娟(1984-),女,山东省德州市人,助教,医学硕士,主要从事肺癌致病基因和抗癌药物方面的研究。
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