吉林大学学报(医学版) 2019, 45(05) 1177-1181 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190535    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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	方法学
	一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价
	华进1, 程志彬1,2, 林春霖1, 戴起宝1, 朱广伟1,2
	1. 福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区, 福建 福州 350005; 2. 福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室, 福建 福州 350005
	摘要：目的：探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果，建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法：荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法（传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法）转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后，肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6） mRNA和flag蛋白表达水平。结果：荧光显微镜下观察，与传统磷酸钙转染法比较，改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高（P<0.01）；Real-time PCR法和Western blotting法检测，与传统转染方法比较，磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后，TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。结论：本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。
	关键词： 磷酸钙转染 293T细胞 肿瘤坏死因子受体相关因子6 flag蛋白
	收稿日期  2019-01-19   修回日期    网络版发布日期  2019-10-08
	DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190535
	基金项目: 国家自然科学基金资助课题（81702424，81872364）；国家卫健委临床重点专科建设项目（普通外科）资助课题（2013）；福建省科技厅自然科学基金资助课题（2018J05127）；福建省卫健委中青年骨干项目资助课题（2018-ZQN-46）；福建省教育厅中青年教师教育科研项目资助课题（JAT170239）
	通讯作者: 朱广伟,主治医师,硕士研究生导师(Tel:0591-87982082,E-mail:zgwzsy@126.com)
	作者简介: 华进(1981-),男,福建省南平市人,主治医师,医学硕士,主要从事炎症性肠病基础与胃肠外科临床方面的研究。
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