吉林大学学报(医学版) 2019, 45(05) 1177-1181 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190535 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R | ||
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方法学 | ||
一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价 | ||
华进1, 程志彬1,2, 林春霖1, 戴起宝1, 朱广伟1,2 | ||
1. 福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区, 福建 福州 350005; 2. 福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室, 福建 福州 350005 |
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摘要:目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法(传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6) mRNA和flag蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后,TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。 | ||
关键词: 磷酸钙转染 293T细胞 肿瘤坏死因子受体相关因子6 flag蛋白 | ||
收稿日期 2019-01-19 修回日期 网络版发布日期 2019-10-08 | ||
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190535 | ||
基金项目: 国家自然科学基金资助课题(81702424,81872364);国家卫健委临床重点专科建设项目(普通外科)资助课题(2013);福建省科技厅自然科学基金资助课题(2018J05127);福建省卫健委中青年骨干项目资助课题(2018-ZQN-46);福建省教育厅中青年教师教育科研项目资助课题(JAT170239) | ||
通讯作者: 朱广伟,主治医师,硕士研究生导师(Tel:0591-87982082,E-mail:zgwzsy@126.com) | ||
作者简介: 华进(1981-),男,福建省南平市人,主治医师,医学硕士,主要从事炎症性肠病基础与胃肠外科临床方面的研究。 | ||
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