)2.儿科学重庆市重点 实验室 认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室，重庆 400014
研究不同浓度视黄酸（RA）对大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后海马神经干细胞增殖的影响，并探讨其可能的作用机制。
体外培养原代海马神经干细胞，并进行免疫荧光鉴定，对神经干细胞施以氧糖剥夺（OGD）损伤，模拟体内HIBD损伤。将细胞分为对照组、OGD组（0 μmol·L－1 RA干预）和不同浓度（0.5、1.0、5.0、10.0和50.0 μmol·L－1） RA干预组，CCK-8法检测OGD后12、24、48和72 h各组细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测各组细胞中视黄酸核受体α（RARα）、糖原合酶激酶 3β（GSK-3β）和G1/S-特异性周期蛋白-D1（CyclinD1）mRNA表达水平和蛋白表达量。利用GSK-3β抑制剂CHIR99021处理不同浓度（0、0.5、5.0和50.0 μmol·L－1）RA干预后的海马神经干细胞，将细胞分为对照组，5.0 μmol·L－1 RA干预组，0、0.5、5.0和50.0 μmol·L－1 RA+20 μmol·L－1 CHIR99021干预组，CCK-8法检测OGD后24 h细胞增殖率，RT-qPCR法和Western blotting法检测各组细胞中RARα、GSK-3β和CyclinD1 mRNA表达水平和蛋白表达量。
免疫荧光鉴定，成功提取并培养原代海马神经干细胞。RA干预后的CCK-8法检测，与OGD组比较，1.0和5.0 μmol·L－1 RA干预组在OGD后各时间点细胞增殖活性均明显升高（P<0.05）；RT-qPCR法和Western blotting法检测，与OGD组比较，5.0和10.0 μmol·L－1 RA干预组细胞中RARα、GSK-3β和CyclinD1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05），1.0、5.0和10.0 μmol·L－1 RA干预组RARα和GSK-3β蛋白表达量增加。加入GSK-3β抑制剂CHIR99021干预后CCK-8法检测，与5.0 μmol·L－1 RA干预组比较，5.0 μmol·L－1 RA+20 μmol·L－1 CHIR99021干预组细胞增殖率明显降低（P<0.01）；RT-qPCR法和Western blotting法检测，与5.0 μmol·L－1 RA干预组比较，0和0.5 μmol·L－1 RA+20 μmol·L－1 CHIR99021干预组细胞中RARα mRNA表达水平明显降低（P<0.01），0、0.5、5.0和50.0 μmol·L－1 RA+20 μmol·L－1 CHIR99021干预组细胞中GSK-3β和CyclinD1 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05），GSK-3β和CyclinD1蛋白表达量减少。
RA促进HIBD损伤后神经干细胞增殖存在适宜浓度窗，其机制可能是RA通过激活GSK-3β调节CyclinD1的转录，进而促进神经干细胞增殖。