吉林大学学报(医学版) 2022, 48(3) 584-590 DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220305    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R

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基础研究
雄激素受体辅调节因子BAP18在大鼠睾丸细胞中的表达及其意义
孙士莹1,2,孙戈1,林琳1,赵越1()
1.中国医科大学生命科学学院 教育部医学细胞生物学重点实验室, 辽宁 沈阳 110122
2.安徽医科大学第二附属医院妇产科, 安徽 合肥 230601
摘要目的

观察溴区PHD结构域转录因子(BPTF)相关蛋白18(BAP18)在睾丸细胞中的表达及其在雄激素受体(AR)信号通路过程中发挥的作用,阐明BAP18调控AR信号通路的具体靶基因,探讨BAP18在睾丸细胞中发挥的生物学功能。

方法

收集大鼠睾丸支持细胞R2C和TM3及睾丸间质细胞TM4和15P-1,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各细胞中BAP18和AR mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中BAP18和AR蛋白表达水平,蛋白免疫共沉淀实验(co-IP)检测在睾丸R2C细胞中BAP18与AR之间的相互作用关系。在R2C细胞中采用带有FLAG标签的BAP18过表达质粒使BAP18过表达(BAP18过表达组)。荧光素酶双基因报告实验检测R2C细胞中荧光素酶活性。对照组采用PcDNA3空载质粒转染R2C细胞,RT-qPCR法检测BAP18过表达前后睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)作用后R2C细胞中BAP18、AR、STAR、HSD3B1、CYP17A1和DDX25 mRNA水平,Western blotting法检测BAP18过表达前后T和DHT作用后R2C细胞中CYP17A1蛋白表达水平。

结果

在睾丸间质细胞和支持细胞中均有BAP18表达,但AR主要在睾丸间质细胞中表达;在睾丸R2C细胞中BAP18与AR存在相互作用,且上调AR介导的基因转录。与对照组比较,在T和DHT作用下BAP18过表达组R2C细胞中CYP17A1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。在R2C细胞中同时外源转染定量BAP18表达质粒后,在DHT的作用下细胞中荧光素酶活性升高近3倍,而在T的作用下,细胞中荧光素酶活性升高1.5倍。过表达BAP18后,BAP18过表达组R2C细胞中AR、STAR、HSD3B1和DDX25 mRNA表达水平与过表达前比较差异无统计学意义(P>0.05),而CYP17A1 mRNA表达水平高于过表达前(P<0.05);T和DHT作用后,R2C细胞中CYP17A1 mRNA表达水平均高于T和DHT作用前(P<0.05)。在细胞中过表达BAP18后,T和DHT作用后细胞中CYP17A1蛋白表达水平明显高于T和DHT作用前(P<0.05),但T和DHT刺激前后细胞中DDX25蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。

结论

BAP18可以在睾丸间质细胞中与AR相互作用并调控AR信号通路重要靶基因CYP17A1,可能参与睾丸间质细胞的生理过程。

关键词: BPTF相关蛋白18 雄激素受体 转录调控 睾丸间质细胞 睾酮 双氢睾酮
收稿日期  2021-08-27   修回日期    网络版发布日期  2022-06-21  
DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220305
基金项目: 科技部“973”计划项目(2013CB945201);国家自然科学基金项目(31171259)
通讯作者: 赵越
作者简介: 孙士莹(1987-),女,辽宁省铁岭市人,助理研究员,医学博士,主要从事产前遗传病方面的研究。

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