人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

doi:吉林省科学技术厅资助课题（20030434）

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

徐波¹,郑永晨¹,费邵阳²

1．吉林大学第二医院中心实验室,吉林长春 130041；2.吉林省第三人民医院神经外科，吉林四平 136000

收稿日期:2006-11-24 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-09-28 发布日期:2007-09-28
通讯作者: 郑永晨

Cloning,prokaryotic expression and identification of human cell division cycle gene 2

XU Bo¹, ZHENG Yong-chen¹,FEI Shao-yang²

1.Central Laboratory, Second Hospital,Jilin University,Changchun 130041,China; 2.Department of Neurosurgery,Third People’〖KG-*3〗s Hospital of Jilin Province,Siping 136000,China

Received:2006-11-24 Revised:1900-01-01 Online:2007-09-28 Published:2007-09-28
Contact: ZHENG Yong-chen

摘要/Abstract

摘要： 目的：从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2（ CDC2），并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法：从人肝癌组织中提取RNA，采用RT-PCR法扩增CDC2 cDNA，用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物，将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和 XhoⅠ两酶切位点之间，转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果：RT-PCR扩增出约894 bp的DNA片段，与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定，成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论：从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因，并在大肠杆菌中表达。

关键词: 基因克隆, 原核表达

Abstract: Abstract:Objective To clone human cell division cycle gene 2 (CDC2) from human liver cancer tissue and express CDC2 protein in E.coli BL-21(DE3).Methods The total RNA was extracted from liver cancer tissue and amplified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR).The PCR products were cloned into the prokaryotic expression vector pET28a(+) followed by DNA sequencing.The recombinant pET28a(+)/CDC2( rCDC2) plasmid was transformed into E.coli.The rCDC2 was induced with IPTG and characterized by SDS-PAGE.Results The cloned CDC2 gene was composed of 894 nucleotides,and is accordance with that reported in GenBank.The prokaryotic expression vector was constructed successfully.The CDC2 protein was successfully expressed in E.coli.Conclusion The CDC2 cDNA is successfully cloned from huma n liver cancer tissue,and can express in E.coli.

Key words: gene clone, prokaryotic expression

中图分类号:

Q784

徐波,郑永晨,费邵阳. 人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定[J]. J4, 2007, 33(5): 834-836.

XU Bo, ZHENG Yong-chen,FEI Shao-yang. Cloning,prokaryotic expression and identification of human cell division cycle gene 2[J]. J4, 2007, 33(5): 834-836.

[1]	王家宁,刘永娟,冉凯凯,孙宾莲,史颖颖. 柯萨奇病毒A16型病毒Vp1蛋白的原核表达、纯化及兔多克隆抗体的制备[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(6): 1717-1727.
[2]	杨馥旭,胡楠楠,郭冲,穆业腾,薛晗,范宇鑫,郭峰霖,关新刚. 肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(6): 1455-1461.
[3]	李时孟, 赵丽纯, 乔璐, 何成彦, 刘卓. ATP5B原核表达和单克隆抗体的制备及其鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2019, 45(01): 184-189.
[4]	李会敏, 伊焕发. 刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(06): 1109-1114.
[5]	邵敏, 王新颖, 刘星, 王燕, 周鹤峰, 葛正龙. hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 59-63.
[6]	李松，杨立彬，张舒岩，金羽，陈秀华，李新，刘玲，李树蕾,李树红. 建鲤重组Cystatin蛋白的原核表达、鉴定及多克隆抗体制备[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(01): 204-209.
[7]	孙晓宇，何钟勤，刘晓红，高心，钟丞，薛莹. 殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 704-709.
[8]	苏雅拉图，张永胜，陈宇杰，胡小平，王丽颖，万敏，吴柒柱. 重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 841-846.
[9]	刘彤，李洋，李丹妮*，耿楠希，李丰. 人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 437-440.
[10]	宋天一，李菁华，张哲，史红艳,孙延波 . 蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 620-624.
[11]	乔伟\|冯乐平\|孙情\|熊毅\|黎玉凤. NOD小鼠CD8α⁺抗原基因克隆载体的构建及其相关蛋白在树突状细胞中的表达[J]. J4, 2012, 38(6): 1058-1062.
[12]	张士尧\|浦昀\|徐坤\|李金华\|原野\|鞠文\|李娟. 重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及其抗原性鉴定[J]. J4, 2012, 38(3): 404-408.
[13]	陈志勇, 刘敏, 龚守良, 董丽华. 辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用[J]. J4, 2011, 37(6): 981-984.
[14]	庾桦,何钟勤,高心,钟丞,李倪娜,薛莹,王志刚 . 殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的克隆及鉴定[J]. J4, 2011, 37(5): 825-828.
[15]	徐丽娟,温剑平,史红艳,孙延波 . 人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达[J]. J4, 2011, 37(4): 661-664.