吉林大学学报(工学版) ›› 2011, Vol. 41 ›› Issue (05): 1513-1516.

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人参皂苷前体工程酵母的构建

梁彦龙,赵寿经,徐立新,刘丽,何沐阳,孙尧   

  1. 吉林大学 生物与农业工程学院, |长春 130022
  • 收稿日期:2010-08-30 出版日期:2011-09-01 发布日期:2011-09-01
  • 通讯作者: 赵寿经(1961-),男,教授,博士生导师.研究方向:生物工程. E-mail:swgc@jlu.edu.cn
  • 作者简介:梁彦龙(1977-),男,讲师,博士.研究方向:生物工程.E-mail:liangyl@jlu.edu.cn
  • 基金资助:

    国家自然科学基金项目(30970259);吉林大学科学前沿与交叉学科创新项目(421032882418);吉林大学种子基金项目.

Construction of engineered yeast producing ginsenoside precursor

LIANG Yan-long, ZHAO Shou-jing, XU Li-xin, LIU Li, HE Mu-yang, SUN Yao   

  1. College of Biological and Agricultural Engineering, Jilin University,Changchun 130022,China
  • Received:2010-08-30 Online:2011-09-01 Published:2011-09-01

摘要:

从人参发根中通过RT-PCR扩增了人参达玛烯二醇合成酶基因。并利用这一基因和酵母表达载体pAUR123构建了产达玛烯二醇的转基因酿酒酵母。阳性克隆经短梗霉素A抗性粗筛,并经PCR、SDS-PAGE和TLC验证。研究结果表明,这一酵母能够表达人参达玛烯二醇合成酶,并产生达玛烯二醇。达玛烯二醇合成酶在整个酵母生长期内均有表达。达玛烯二醇合成酶活和达玛烯二醇水平在YDP液体培养基中培养36 h和42 h时达到最高,分别为132U/g干细胞和251 μg/L。

关键词: 生物工程, 达玛烯二醇合成酶, 人参发根, 酿酒酵母

Abstract:

Dammarenediol gene was amplified by RT-PCR from Panax ginseng hairy roots. A engineered saccharomyces cerevisiae was constructed using this gene and the yeast expression vector pAUR123. The positive clone was selected by Aureobasidin A resistance, and was confirmed by Polymerase Chain Reaction (PCR), Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and Thin Layer Chromatography (TLC). The results show that the engineered yeast could express functional dammarenediol synthase and produce dammarenediol. Dammarenediol synthase was expressed throughout the growth phase of the engineered yeast. The highest levels of dammarenediol synthase and dammarenediol (132 U/g dried cells and 251 μg/L) in the engineered yeast were observed after 36 h and 42 h growth in liquid YDP medium, respectively.

Key words: bioengineering, dammarenediol synthase, panax ginseng hairy roots, saccharomyces cerevisiae

中图分类号: 

  • Q812
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