凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达

doi:中国博士后科学基金资助课题

凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达

刘晓冬¹，马淑梅¹，LANG Glen², SEHON Alec²

1. 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春，130021;2. 加拿大曼尼拖巴大学

收稿日期:2004-09-29 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-01-28 发布日期:2005-01-28

Construction of recombinant vector containing FⅧ-C2 and its expression in NIH3T3 cells

LIU Xiao-dong¹, MA Shu-mei¹, LANG Glen², SEHON Alec²

1.MH Radiobiology Research Unit, School of Public Health, Jilin University, Changchun 130021,China;2. Department of Immunology, Faculty of Medicine, University of Manitoba, Canada,R3E 0W3

Received:2004-09-29 Revised:1900-01-01 Online:2005-01-28 Published:2005-01-28

摘要/Abstract

摘要： 医学院免疫系，加拿大温尼伯 R3E 0W3 目的：构建人凝血因子FⅧ中具有免疫活性的C2结构域表达载体并通过真核宿主细胞表达出多肽。方法：从HEK293细胞提取总RNA，经RT-PCR扩增获得目的片段。将该片段与信号肽共同构建在同一表达载体，并在NIH3T3细胞中表达，Western blotting检测。结果：经限制性酶切鉴定和测序分析证实，采用RT-PCR成功地完成FⅧ-C2 cDNA的扩增和表达载体的构建，重组载体转染进入NIH3T3细胞后，经检测培养上清中的蛋白成分证实，成功地表达出FⅧ-C2结构域多肽。结论：重组表达载体的构建是表达出分泌型FⅧC2多肽的一种可行的方法。

关键词: C2结构域, 逆转录聚合酶链反应, 基因重组

Abstract: Objective To construct the complementary DNA (cDNA) of FⅧ-C2 by gene engineering and express the biologically active domain in NIH 3T3. Methods The total RNA extracted from 293 cells and FⅧ-C2 was amplified by RT-PCR. The product was then inserted into pTARGET vector together with signal peptide sequence. The recombinant vector was transfected into NIH3T3 cells followed by the detection of the expression of FⅧ-C2 by Western blotting. Results The cDNA of FⅧ-C2 was identified correctly by endonucleases cleavage and sequencing. The recombinant FⅧ-C2 peptide was obtained by detection of FⅧ-C2 from the supernatant of NIH3T3. Conclusion The construction of recombinant vector is a feasible way to express secretive FⅧ-C2.

Key words: C2 domain, reverse transcriptase polymerase chain reaction, gene recombination

中图分类号:

刘晓冬，马淑梅，LANG Glen, SEHON Alec. 凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达[J]. J4, 2005, 31(1): 35-38.

LIU Xiao-dong, MA Shu-mei, LANG Glen, SEHON Alec. Construction of recombinant vector containing FⅧ-C2 and its expression in NIH3T3 cells[J]. J4, 2005, 31(1): 35-38.

[1]	董泽丰, 郑田利, 范雪佳, 裴晓方. 2011-2013年成都地区发热呼吸道症候群住院患儿鼻病毒流行病学特征[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 177-181.
[2]	杨艳明\|刘林林\|刘念\|王志成. 辐射诱导的重组载体pEgr1-hsTRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用[J]. J4, 2012, 38(3): 398-403.
[3]	王剑锋\|方芳\|刘扬\|吴嘉慧\|龚守良\|王志成. Egr1介导的人截短型凋亡诱导因子表达载体的构建及其在乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律[J]. J4, 2012, 38(3): 521-527.
[4]	宋明旭, 李莉华, 丁苏宁, 刘志辉, 周希科. PDGF家族在原发性胃腺癌组织中的表达及其意义[J]. J4, 2011, 37(1): 97-101.
[5]	刘洁, 贾天军, 刘雪晴, 贾晓辉, 翟雪琼. 人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2 C端基因的克隆与鉴定[J]. J4, 2011, 37(1): 51-55.
[6]	张晓霞, 孙晓琦, 张松灵, 高咏梅, 田海涵. 卵巢浆液性囊腺癌组织中β-连环蛋白的表达及其意义[J]. J4, 2010, 36(3): 536-539.
[7]	杨艳明, 李艳博, 贾晓晶, 曲雅勤. 乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因载体的构建及表达[J]. J4, 2009, 35(3): 431-436.
[8]	张晓霞，费军伟，舒畅，倪劲松，王芯蕊，李荷莲. 卵巢浆液性囊腺癌组织中prostasin基因的表达及意义[J]. J4, 2009, 35(2): 280-283.
[9]	张宸豪，柳忠辉，刘海岩，王轶楠，葛敬岩，于昉，台桂香. 激活素A及其结合蛋白在STZ损伤小鼠胰腺组织中的表达及意义[J]. J4, 2009, 35(2): 292-295.
[10]	汲坤，王波，李馨，于浩，张灵，胡嘉弟，赵雪俭，李扬. 细胞死亡调节因子GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中的表达及意义[J]. J4, 2009, 35(1): 146-149.
[11]	马舒贝，孙威，李霞，刘亢丁. 大鼠局灶性脑缺血后脑组织Ang-1和Ang-2 mRNA的表达及意义[J]. J4, 2009, 35(1): 30-33.
[12]	张晓霞，费军伟，于晓伟，倪劲松，王芯蕊，李荷莲. 卵巢癌组织中PI3K的表达及意义[J]. J4, 2008, 34(6): 1027-1030.
[13]	李光虎，刘伟，付彤，刘国津. muc-1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义[J]. J4, 2008, 34(6): 1046-1049.
[14]	李玉琴，黄民，王英凯，金京兰，唐彤宇，高沿航，王丹. 热休克蛋白70在消化性溃疡及急性糜烂出血性胃炎组织中的表达及意义[J]. J4, 2008, 34(5): 846-849.
[15]	牟旭鹏，孔宁，申茉函，韩东，张林，颜炜群. 人碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达[J]. J4, 2008, 34(5): 755-758.