目的 探讨敲低小鼠胚胎腭突间充质细胞（mEPMCs）初级纤毛（PC）重要组件驱动蛋白家族成员3B（KIF3B）基因对细胞自噬水平的作用，并阐明其作用机制。 方法 收集体外培养孕龄14.5 d C57BL/6J小鼠的mEPMCs，根据是否敲低KIF3B基因和使用平滑因子受体激动剂（SAG）激活音猬因子（Shh）信号通路及其下游共受体Smo，分为对照组（给予生理盐水）、空载病毒转染细胞组（sh-NC组）（给予慢病毒转染）、敲低KIF3B组（sh-KIF3B组）（给予KIF3B基因敲低）、敲低KIF3B加入SAG组（sh-KIF3B+SAG组）（给予KIF3B基因敲低后加入SAG），每组5只大鼠。透射电镜观察各组mEPMCs中自噬小体/自噬溶酶体形态表现及数量，Western blotting法检测各组mEPMCs中自噬相关蛋白苄氯素1（Beclin-1）和p62及Shh信号通路中Shh和Smo蛋白表达水平。 结果 透射电镜观察，与对照组比较，sh-KIF3B组mEPMCs中自噬小体/自噬溶酶体数量明显增加（P<0.05）；与sh-KIF3B组比较，sh-KIF3B+SAG组mEPMCs中自噬小体/自噬溶酶体数量明显减少（P<0.05）。Western blotting法检测，与对照组比较，sh-KIF3B组mEPMCs中Beclin-1蛋白表达水平明显升高 （P<0.05），KIF3B、p62、Shh和Smo蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）；与sh-KIF3B组比较，sh-KIF3B+SAG组mEPMCs中Shh、Smo和p62蛋白表达水平明显升高（P<0.01），Beclin-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 敲低KIF3B基因可促进mEPMCs自噬，其机制可能与其抑制Shh信号通路有关。

目的 探讨血管生成素样蛋白6（ANGPTL6）在肝脏纤维化中的作用，分析工程化外泌体（Exo）递送ANGPTL6 mRNA对肝脏纤维化的改善作用。 方法 将12只C57BL/6小鼠随机分为橄榄油组（OIL组）（腹腔注射橄榄油）和四氯化碳（CCl₄）组（腹腔注射橄榄油与CCl₄混合液），每组各6只；另12只C57BL/6小鼠，随机分为对照组（喂食含蛋氨酸胆碱对照饲料）和蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）组（喂食MCD饲料），构建2种小鼠肝脏纤维化模型，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blotting法检测各组小鼠肝组织中ANGPTL6 mRNA和蛋白表达水平。将30只小鼠随机分为橄榄油+磷酸盐缓冲液（PBS）组（OIL+PBS组）（腹腔注射橄榄油，每周2次，8周后，尾静脉注射PBS缓冲液6周，每周2次）、CCl₄+Exo-绿色荧光蛋白 （GFP） mRNA组（腹腔注射CCl₄混合液制备肝纤维化模型后，尾静脉注射装载GFP mRNA的工程化Exo 6周）和CCl₄+Exo-ANGPTL6 mRNA组（腹腔注射CCl₄混合液制备肝纤维化模型后，尾静脉注射装载ANGPTL6 mRNA的工程化Exo 6周），每组10只。CCl₄+Exo-GFP mRNA组CCl₄+Exo-ANGPTL6 mRNA组小鼠每周注射工程化Exo 2次，每次每只小鼠注射20 μg（体积100 μL）。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，Masson染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝脏胶原沉积情况，免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平，RT-qPCR法检测各组小鼠肝组织中α-SMA、Ⅰ型胶原α1链（Col1a1）、转化生长因子β1（TGF-β1）和金属蛋白酶组织抑制剂1 （TIMP-1） mRNA表达水平。 结果 生物信息学分析，ANGPTL6在活化肝星状细胞（aHSC）中表达明显下调。超声检查，OIL组小鼠肝脏表面细腻光滑；与OIL组比较，CCl₄组小鼠肝脏切面粗糙，表面凹凸不平。RT-qPCR和Western blotting法检测，与OIL组比较，CCl₄组小鼠肝组织中ANGPTL6 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。从HEK293T细胞上清液中提取的工程化Exo结构完整，经尾静脉注射后能够在纤维化肝脏中大量富集，GFP蛋白在肝脏中大量表达。ELISA法检测，与OIL+PBS组比较，CCl₄+Exo-GFP mRNA组小鼠血清中ALT和AST活性均明显升高（P<0.05）；与CCl₄+Exo-ANGPTL6 mRNA组比较，CCl₄+Exo-GFP mRNA组小鼠血清中ALT和AST活性均明显降低（P<0.05）。Masson染色和天狼猩红染色观察，与OIL+PBS组比较，CCl₄+Exo-GFP mRNA组小鼠肝脏胶原沉积明显增加，相对胶原面积增加（P<0.05）；与CCl₄+Exo-GFP mRNA组比较，CCl₄+Exo-ANGPTL6 mRNA组小鼠肝脏胶原沉积明显减少，相对胶原面积减少（P<0.05）。免疫组织化学法检测，与OIL+PBS组比较，CCl₄+Exo-GFP mRNA组小鼠肝组织中α-SMA蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与CCl₄+Exo-GFPmRNA组比较，CCl₄+Exo-ANGPTL6mRNA组小鼠肝组织中α-SMA蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与OIL+PBS组比较，CCl4+Exo-GFP mRNA组小鼠肝组织中Col1a1、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）；与CCl₄+Exo-GFPmRNA组比较，CCl₄+Exo-ANGPTL6 mRNA组小鼠肝组织中Col1a1、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。 结论 小鼠尾静脉注射工程化Exo递送的ANGPTL6 mRNA主要富集在肝脏，工程化Exo递送ANGPTL6 mRNA对小鼠肝纤维化具有改善作用。

目的 筛选适宜的D-半乳糖（D-gal）浓度和造模周期，建立其诱导的小鼠衰老相关认知功能障碍模型，并进行综合评价。 方法 50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和100、200、400及800 mg·kg^-1 D-gal组，每组10只。各浓度D-gal组小鼠每日皮下注射相应浓度D-gal，每日1次，对照组小鼠注射等体积生理盐水。监测各组小鼠体质量及饮水量，采用前肢抓力值测试和爬杆运动能力实验中小鼠爬杆时间评估各组小鼠运动协调能力，通过新物体识别实验、Y迷宫实验及Morris水迷宫实验评价各组小鼠认知功能，HE染色和尼氏染色观察2组小鼠脑组织病理形态表现，免疫组织化学法检测各组小鼠脑组织中β-半乳糖苷酶（β-gal）蛋白表达情况，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组小鼠海马组织中白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-18和IL-4 mRNA表达水平，Western blotting法检测2组小鼠海马组织中β-gal、p53和p16蛋白表达水平。 结果 对照组和各浓度D-gal组小鼠的体质量增长趋势一致，差异无统计学意义（P>0.05），饮水量比较差异无统计学意义（P>0.05）。皮下注射D-gal第8周后，与对照组比较，200和400 mg·kg^-1 D-gal组小鼠前肢抓力值均明显降低（P<0.05或P<0.01），200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠爬杆时间明显延长（P<0.05），200和400 mg·kg^-1 D-gal组小鼠识别指数明显降低（P<0.01），100、200、400和800 mg·kg^-1 D-gal组小鼠自发交替率明显降低（P<0.05或P<0.01），逃避潜伏期明显增加（P<0.05）。空间探索实验，与对照组比较，200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠逃避潜伏期明显增加（P<0.05）。HE染色和尼氏染色观察，与对照组比较，200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠海马组织神经元排列紊乱、核浓染和核固缩明显、形态结构异常，尼氏染色阳性细胞数量明显减少。免疫组织化学法检测，与对照组比较，200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠海马组织CA1区、CA3区和皮层（Cortex）区β-gal蛋白呈强阳性表达。RT-qPCR法检测，与对照组比较，200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠海马组织中IL-1β、IL-18和TNF-α mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01），IL-4 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组比较，200 mg·kg^-1 D-gal组小鼠海马组织中β-gal、p53和p16蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）。 结论 每日给小鼠皮下注射200 mg·kg^-1 D-gal、持续8周可制备衰老相关认知功能障碍小鼠模型。

目的 探讨针刺对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠股四头肌卫星细胞分化和凋亡的影响，并阐明其相关机制。 方法 选取40只SPF级大鼠随机分为对照组、模型组、塞来昔布组和针刺组，每组10只。对照组大鼠仅切开关节腔后缝合，模型组、塞来昔布组和针刺组大鼠复制KOA模型。测量各组大鼠患肢股骨段最大周长、大鼠体质量和股四头肌湿重，计算各组大鼠股四头肌湿重维持率和股四头肌湿重/体质量比值。HE染色观察各组大鼠关节软骨和股四头肌组织病理形态表现，末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测各组大鼠关节软骨和股四头肌组织中细胞凋亡指数，免疫荧光法检测各组大鼠股四头肌组织中白细胞介素6（IL-6）、Janus激酶（JAK）及信号转导与转录激活因子3（STAT3）蛋白表达水平，Western blotting 法检测各种大鼠股四头肌组织中IL-6/JAK/STAT3信号通路、肌卫星细胞及凋亡相关蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，模型组大鼠患侧后腿围度、股四头肌湿重、湿重维持率和湿重/体质量比值均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，塞来昔布组和针刺组大鼠患侧后腿围度、股四头肌湿重、湿重维持率和湿重/体质量比值均明显升高（P<0.05）；与塞来昔布组比较，针刺组大鼠患侧后腿围度、股四头肌湿重、湿重维持率和湿重/体质量比值均明显升高（P<0.05）。HE染色观察，对照组大鼠膝关节软骨保持完整，软骨细胞聚集且水平排列，边缘平整，股四头肌细胞呈长圆柱状，有序排列，形态规则；模型组大鼠膝关节软骨较薄，边缘粗糙，软骨层数减少，排列无序，股四头肌纤维排列紊乱，部分肌纤维溶解和肌细胞膜损伤，并伴有肌纤维碎片和大量炎症渗出液；塞来昔布组大鼠膝关节软骨形态大体正常，偶见软骨排列不规律和厚度减少，偶尔可见散在的坏死软骨细胞，股四头肌肌纤维和肌膜较为完整，有新生肌纤维的出现，部分肌纤维边缘模糊，伴有少量细胞碎片和轻微炎症浸润；针刺组大鼠膝关节软骨结构保持完整，边缘平滑，偶尔边缘粗糙，软骨细胞聚集且排列有序。TUNEL法检测，与对照组比较，模型组大鼠关节软骨和股四头肌组织中细胞凋亡指数明显升高（P<0.05）；与模型组比较，塞来昔布组和针刺组大鼠关节软骨及股四头肌组织中细胞凋亡指数均明显降低（P<0.05）；与塞来昔布组比较，针刺组大鼠关节软骨及股四头肌组织中细胞凋亡指数明显降低（P<0.05）。免疫荧光法检测，与对照组比较，模型组大鼠股四头肌组织中IL-6、JAK和STAT3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，塞来昔布组和针刺组大鼠股四头肌组织中IL-6、JAK及STAT3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与塞来昔布组比较，针刺组大鼠股四头肌组织中IL-6、JAK和STAT3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组大鼠股四头肌组织IL-6、JAK、STAT3、特异性蛋白配对盒转录因子7（Pax7）、肌间线蛋白（Desmin）、肌球蛋白（Myosin）和肌细胞生成素（Myogenin）蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，塞来昔布组和针刺组大鼠股四头肌组织中IL-6、JAK、STAT3、Pax7、Desmin、Myosin和Myogenin蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与塞来昔布组比较，针刺组大鼠股四头肌组织中IL-6、JAK、STAT3、Pax7、Desmin、Myosin和Myogenin蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。与对照组比较，模型组大鼠股四头肌组织中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2），B细胞淋巴瘤xl（Bcl-xl）和髓系细胞白血病1（MCL1）蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸依赖性天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，塞来昔布组和针刺组大鼠股四头肌组织中Bcl-2、Bcl-xl和MCL1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）；与塞来昔布组比较，针刺组大鼠股四头肌组织中Bcl-2、Bcl-xl和MCL1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。 结论 针刺可促进膝骨关节炎模型大鼠股四头肌卫星细胞分化，并抑制肌细胞凋亡，其机制可能与上调股四头肌组织中IL-6、JAK和STAT3蛋白表达有关。

目的 研究血管生成素1（Ang-1）和酪氨酸激酶受体2（Tie2）抑制剂对高糖培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）葡萄糖转运的作用，并阐明其作用机制。 方法 体外高糖（30 mmol·L^-1）培养HUVECs，采用0、200、500、1 000和2 000 μg·L^-1 Ang-1及0、2 500、5 000和7 500 nmol·L^-1 Tie2抑制剂处理细胞，细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活性，筛选Ang-1和Tie2抑制剂最佳作用浓度。葡萄糖试剂盒检测Ang-1干预细胞后HUVECs上清液中葡萄糖水平。HUVECs细胞随机分为空白对照组（NG组）、高糖作用组（HG组）、HG+Tie2抑制剂组（HG+In-Tie2组）、HG+Ang-1组、HG+Ang-1+Tie2抑制剂组（HG+Ang-1+In-Tie2组）和HG+Ang-1+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂组（HG+Ang-1+LY294002组）。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测各组细胞增殖活性，恶唑黄/碘化丙啶（YO-PRO-1/PI）法检测各组细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中Ang-1和Tie2 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中Tie2、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）蛋白表达水平及磷酸化PI3K（p-PI3K）/PI3K和磷酸化蛋白激酶（p-AKT）/AKT比值。 结果 CCK-8法检测，与0 μg·L^-1 Ang-1比较，200 μg·L^-1 Ang-1作用HUVECs 48 h后HUVECs细胞活性明显升高（P<0.01）；与0 nmol·L^-1 Tie2抑制剂比较，2 500、5 000和7 500 nmol·L^-1 Tie2抑制剂作用下HUVECs细胞活性明显降低（P<0.01）；Ang-1和Tie2抑制剂的最佳浓度分别为200 μg·L^-1及2 500 nmol·L^-1。与NG组比较，HG组HUVECs上清液中葡萄糖水平明显升高（P<0.01）；与HG组比较，Ang-1组HUVECs上清液中葡萄糖水平明显降低（P<0.01）。EdU法检测，与NG组比较，HG组HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01）；与HG组比较，HG+In-Tie2组HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01），HG+Ang-1组HUVECs增殖活性明显升高（P<0.01）；与HG+Ang-1组比较，HG+Ang-1+In-Tie2组和HG+Ang-1+LY294002组HUVECs增殖活性均明显降低（P<0.01）。YO-PRO-1/PI法检测，与NG组比较，HG组HUVECs凋亡率明显升高（P<0.01）；与HG组比较，HG+In-Tie2组HUVECs凋亡率明显升高（P<0.01），HG+Ang-1组HUVECs凋亡率明显降低（P<0.01）；与HG+Ang-1组比较，HG+Ang-1+In-Tie2组和HG+Ang-1+LY294002组HUVECs凋亡率均明显升高（P<0.01）。RT-qPCR法检测，与NG组比较，HG组和HG+In-Tie2组HUVECs中Ang-1和Tie2 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）；与HG组比较，HG+In-Tie2组HUVECs中Ang-1和Tie2 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01），HG+Ang-1组HUVECs中Ang-1和Tie2 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）；与HG+Ang-1组比较， HG+Ang-1+In-Tie2组和HG+Ang-1+LY294002组HUVECs中Ang-1和Tie2 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。Western blotting法检测，与NG组比较，HG组HUVECs中Tie2蛋白表达水平明显降低（P<0.01），GLUT1和GLUT4蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）；与HG组比较，HG+In-Tie2组HUVECs中Tie2、GLUT1和GLUT4蛋白表达水平均明显降低（P<0.01），HG+Ang-1组HUVECs中Tie2蛋白表达水平明显升高（P<0.01），GLUT1和GLUT4蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）；与HG+Ang-1组比较，HG+Ang-1+In-Tie2组和HG+Ang-1+LY294002组HUVECs中Tie2、GLUT1和GLUT4蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。与NG组比较，HG组HUVECs中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均明显升高（P<0.01）；与HG组比较，HG+In-Tie2组HUVECs中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均明显降低（P<0.01），HG+Ang-1组HUVECs中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均明显降低（P<0.01）；与HG+Ang-1组比较，HG+Ang-1+In-Tie2组和HG+Ang-1+LY294002组HUVECs中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均明显降低（P<0.01）。 结论 Ang-1可下调高糖培养HUVECs中GLUT1和GLUT4的表达，Ang-1与Tie2结合可能过PI3K/AKT信号通路下调GLUT1和GLUT4参与高糖培养HUVECs的葡萄糖转运。

目的 探讨表儿茶素（EC）对对乙酰氨基酚（APAP）诱导小鼠肝损伤的改善作用，并阐明其可能的作用机制。 方法 将60只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、APAP模型组、低剂量（10 mg·kg^-1）EC组、中剂量（20 mg·kg^-1）EC组和高剂量（40 mg·kg^-1）EC组，每组12只。除空白对照组外，其余各组小鼠给予腹腔注射APAP（200 mg·kg^-1）诱导肝损伤模型。APAP注射前1 h，低、中和高剂量EC组小鼠腹腔分别注射10、20和40 mg·kg^-1 EC。36只核因子E2相关因子2（Nrf2）缺陷小鼠 （Nrf2^-/-小鼠） 随机分为对照组、APAP组和APAP+EC组，每组12只。造模24 h后处死小鼠，收集小鼠血液和肝组织用于后续检测。采用HE染色观察各组小鼠肝组织病理形态表现，试剂盒检测各组小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性及小鼠肝组织中髓过氧化物酶（MPO）活性和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、丙二醛（MDA）、三磷酸腺苷（ATP）、谷胱甘肽（GSH）及亚铁离子（Fe2?）水平，Western blotting法检测各组小鼠肝组织中核因子κB（NF-κB）和Nrf2信号通路相关蛋白表达水平。 结果 HE染色，与APAP模型组比较，不同剂量EC组APAP诱导小鼠肝病理损伤明显改善。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠血清中ALT和AST活性明显升高（P<0.01）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量EC组小鼠血清中ALT及AST活性明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠肝组织中MPO活性及TNF-α和IL-1β水平明显升高（P<0.01）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量EC组小鼠肝组织中MPO活性及TNF-α和IL-1β水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠肝组织中MDA和Fe²⁺水平明显升高（P<0.05），ATP和GSH水平明显降低（P<0.05）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量小鼠肝组织中MDA和Fe²⁺水平明显降低（P<0.05或P<0.01），ATP和GSH水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠肝组织中氨基酸交换转运蛋白（xCT）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量小鼠肝组织中xCT和GPX4蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠肝组织中核因子κB（NF-κB） p-p65和磷酸化NF-κB抑制剂α（p-IκBα）蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量EC组小鼠肝组织中NF-κB p-p65和p-IκBα蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较，APAP模型组小鼠肝组织中Nrf2和血清素加氧酶1（HO-1）蛋白水平明显升高（P<0.05）；与APAP模型组比较，低、中和高剂量EC组小鼠肝组织中Nrf2和HO-1蛋白水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较，APAP组Nrf2^-/-小鼠血清中AST和ALT活性及肝组织中MDA和Fe²⁺水平明显升高（P<0.01），肝组织中ATP和GSH水平明显降低（P<0.01）。 结论 EC对APAP诱导的小鼠肝损伤具有改善作用，其机制可能与EC激活Nrf2/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

目的 探讨欧前胡素（IMP）对支气管哮喘小鼠气道重塑的影响，并阐明其可能的机制。 方法 40只SFP级雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量IMP组（IMP-L组）、高剂量IMP组（IMP-H组）和地塞米松组，每组8只。除对照组外，其余各组小鼠腹腔注射卵清蛋白（OVA）混悬液构建小鼠哮喘模型。造模1周后观察各组小鼠每日哮喘症状并进行评分，8周后检测各组小鼠增强呼吸间歇（Penh）值以评估气道反应性，流式细胞术检测各组小鼠肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞百分率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组小鼠血清IgE和BALF中白细胞介素（IL）-13、IL-5、IL-4及γ干扰素（IFN-γ）水平，HE、PAS和Masson染色法观察各组小鼠肺组织病理形态表现、杯状细胞数量及胶原沉积情况，免疫组织化学染色法观察各组小鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）整合位点家族成员5A（Wnt5A）蛋白表达情况，Western blotting法检测各组小鼠肺组织中Wnt5A、细胞髓细胞瘤基因（c-Myc）、β-连环蛋白（β-catenin）和α-SMA蛋白表达水平，免疫荧光法检测各组小鼠肺组织中α-SMA蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，模型组小鼠哮喘症状评分升高（P<0.01），Penh值明显升高（P<0.01），血清IgE水平及BALF中嗜酸性粒细胞百分率和IL-13、IL-5及IL-4水平均明显升高（P<0.05或P<0.01），IFN-γ水平明显降低（P<0.05），肺组织中α-SMA和Wnt5A蛋白表达水平明显升高（P<0.01），Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达明显升高（P<0.01）；免疫荧光法检测，肺组织中α-SMA蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与模型组比较，IMP-L组、IMP-H组和地塞米松组小鼠哮喘症状评分降低（P<0.01），IMP-H组小鼠Penh值降低（P<0.05），IMP-L组、IMP-H组和地塞米松组小鼠血清IgE水平及BALF中嗜酸性粒细胞百分率和IL-13、IL-5及IL-4水平降低（P<0.05或P<0.01），IFN-γ水平明显升高（P<0.05），肺组织中α-SMA和Wnt5A蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01），Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）；免疫荧光法检测，肺组织α-SMA蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 IMP对支气管哮喘小鼠气道重塑具有改善作用，并可抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。

目的 通过生物信息学方法和细胞实验探讨烟碱型乙酰胆碱受体α5亚基（CHRNA5）对胰腺导管腺癌（PDAC）侵袭和增殖的影响，并分析其调控通路，为寻找新的胰腺癌治疗靶点提供依据。 方法 自癌症基因组图谱（TCGA）和基因型组织表达（GTEx）数据库等公共数据库下载泛肿瘤和正常组织的转录组、基因变异和临床数据，利用Wilcoxon检验比较CHRNA5 mRNA在泛肿瘤患者与健康个体中的表达水平。通过基因表达综合数据库（GEO）中的数据集进一步比较胰腺癌和癌旁组织中CHRNA5 mRNA的表达水平，并采用三分法按照CHRNA5 mRNA的不同表达量将数据分为CHRNA5高表达、中表达和低表达组，对CHRNA5高表达和低表达组样本进行生存分析，以评估CHRNA5对胰腺癌预后的影响。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和免疫组织化学法检测CHRNA5在肿瘤组织、癌旁组织、肿瘤细胞和正常细胞中mRNA和蛋白表达情况。对转录组数据进行差异分析和标志基因（Hallmark）与反应组数据库（Reactome）富集分析。基于转录组数据对PDAC进行免疫细胞浸润分析，同时进行肿瘤突变负荷（TMB）分析、单核苷酸变异（SNV）和拷贝数目变异（CNV）分析。将小干扰RNA（si）-NC和si-CHRNA5转染至MIA PaCa-2和Capan-2细胞，作为NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测在乙酰胆碱（ACh）（10 μmol·L^-1）和非ACh条件下各组细胞的增殖活性，采用Western blotting法检测各组细胞中c-Myc蛋白表达情况。 结果 与正常组织比较，包括胰腺癌在内的28种肿瘤组织中CHRNA5 mRNA表达水平升高（校正后P<0.05）。RT-qPCR和免疫组织化学法检测，与癌旁组织和正常胰腺导管细胞比较，CHRNA5在肿瘤组织和PDAC细胞中高表达。生存分析，高表达CHRNA5的PDAC患者较低表达患者预后差。在PDAC和对照样本中鉴定出994个差异表达基因（DEGs），其中上调基因381个，下调基因613个。基因集富集分析（GSEA），CHRNA5与氧化磷酸化、细胞增殖、免疫浸润和细胞周期高度有关。免疫分析，高表达CHRNA5的样本较低表达CHRNA5的样本免疫浸润更差。与CHRNA5低表达组比较，CHRNA5高表达组胰腺癌进展相关基因KRAS、TP53和SMAD4基因突变率更高。细胞实验，与NC+Ach组比较，siRNA-1+Ach组和siRNA-2+Ach细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测，与NC组比较，siRNA-1组和siRNA-2组细胞中c-Myc蛋白表达量降低。 结论 CHRNA5通过髓细胞瘤病毒癌基因（MYC）家族调控细胞周期，从而影响胰腺肿瘤细胞的增殖，促进PDAC的进展，表明CHRNA5是治疗胰腺癌的潜在靶点。

目的 探讨血红素结合蛋白1（HEBP1）基因下调对小胶质细胞BV2功能的影响，分析HEBP1在小胶质细胞中发挥的关键作用。 方法 构建阴性对照和HEBP1敲减的小干扰RNA（siRNA），敲减鼠源的小胶质细胞BV2中的HEBP1基因，获得HEBP1敲减BV2细胞模型。BV2细胞分为si-NC组、si-HEBP1-1组、si-HEBP1-2组和si-HEBP1-3组，采用实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）法和Western blotting法检测细胞敲减后HEBP1 mRNA和蛋白表达水平，筛选出敲减效果最显著的siRNA用于后续实验。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测si-NC组和si-HEBP1组BV2细胞增殖活性，细胞划痕实验检测2组BV2细胞迁移率，试剂盒检测2组BV2细胞中线粒体膜电位和活性氧（ROS）水平，线粒体呼吸功能测定仪检测2组BV2细胞线粒体呼吸功能。BV2细胞分为si-NC组、si-NC+脂多糖（LPS）组、si-HEBP1组和si-HEBP1+LPS组，RT-qPCR法检测各组BV2细胞中HEBP1、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） mRNA表达水平，Western blotting法检测各组BV2细胞中HEBP1蛋白表达水平。 结果 携带红色荧光标签CY3的siRNA转染BV2细胞，转染效率可达90%以上；与si-NC组比较，si-HEBP1-1组、si-HEBP1-2组和si-HEBP1-3组BV2细胞中HEBP1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01），其中si-HEBP1-1组降低最明显；与si-NC组比较，si-HEBP1-1组、si-HEBP1-2组和si-HEBP1-3组BV2细胞中HEBP1 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01），其中si-HEBP1-1组降低最明显，提示si-HEBP1-1是HEBP1敲减效果最好的siRNA，HEBP1敲减的BV2细胞模型构建成功。CCK-8法检测，与si-NC组比较，si-HEBP1组BV2细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）；从90 min开始，2组细胞增殖活性差异更加明显。细胞划痕实验，与si-NC组比较，si-HEBP1组细胞迁移率明显降低（P<0.05）。荧光显微镜观察，与si-NC组比较，si-HEBP1组细胞线粒体膜电位明显降低（P<0.05）；与si-NC组比较，si-HEBP1组BV2细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）。细胞线粒体呼吸功能测定，与si-NC组比较，si-HEBP1组BV2细胞基础呼吸值（ROUNTINE）和细胞质子漏耗氧量（LEAK）均明显降低（P<0.05或P<0.01），2组细胞电子传递呼吸值（ETS）和剩余耗氧量（ROX）差异均无统计学意义（P>0.05）；与si-NC组比较，si-HEBP1组BV2细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量明显减少（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与si-NC组比较，si-NC+LPS组BV2细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平均明显升高（P<0.01）；与si-HEBP1组比较，si-HEBP1+LPS组BV2细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平均明显升高（P<0.01）；与si-NC+LPS组比较，si-HEBP1+LPS组BV2细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）。 结论 敲减HEBP1基因可降低小胶质细胞BV2增殖和迁移能力，并增强对LPS刺激的炎症反应，其机制可能与BV2细胞线粒体功能受损和ATP产生减少有关。

目的 观察脂肪源性干细胞（ADSC）联合脱细胞支架（AS）对坐骨神经损伤（SNI）大鼠脊神经节超微结构和睫状神经营养因子（CNTF）、Janus激酶2（JAK2）、磷酸化JAK2（p-JAK2）、信号转导与转录激活因子3（STAT3）和磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白及mRNA表达的影响，阐明ADSC联合AS对SNI大鼠脊神经节的保护作用及其可能机制。 方法 分离培养大鼠ADSC并检测其多向分化潜能。制备大鼠AS，将ADSC注入至AS中构建组织工程神经。36只大鼠随机分为对照组、模型组、AS组和ADSC+AS组。对照组大鼠常规饲养，不进行任何处理，其余各组大鼠采用切除右侧坐骨神经10 mm的方法建立SNI模型，模型组不再处理，AS组和ADSC+AS组大鼠分别将AS和构建的组织工程神经桥接于损伤神经的两断端处。术后6周，采用透射电镜观察各组大鼠脊神经节超微结构，免疫荧光法检测各组大鼠脊神经节中CNTF、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组大鼠脊髓神经节中CNTF、JAK2和STAT3 mRNA表达水平。 结果 原代ADSC培养7 d，倒置显微镜下可见数量较多、体积较大且呈长梭形的细胞，类似簇状或旋涡状排列；油红O染色镜下可见细胞中红色的脂滴，茜素红染色镜下可见钙化结节，表明分离培养的细胞具有多向分化能力。与正常神经组织比较，大鼠AS中DNA水平明显出降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组大鼠脊神经节中细胞核膜凹凸不平，呈锯齿状改变，胞质内细胞器数目减少，线粒体肿胀、嵴断裂或缺失，结构不清晰；CNTF蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.01），p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均明显升高（P<0.01），JAK2和STAT3 mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）。与模型组比较，AS组大鼠脊神经节中细胞核膜锯齿状改变明显减轻，胞质中细胞器数量增加，线粒体肿胀减轻；ADSC+AS组大鼠脊神经节中细胞核膜趋向完整，细胞器数量增加，线粒体肿胀和空泡化明显减轻；AS组和ADSC+AS组大鼠脊神经节中CNTF蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.01），p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均明显降低（P<0.01），JAK2和STAT3 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。与AS组比较，ADSC+AS组大鼠脊神经节中CNTF蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01），p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均明显降低（P<0.01），JAK2和STAT3 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 ADSC联合AS应用可改善SNI大鼠脊神经节超微结构，其机制可能与ADSC联合AS应用可增加脊神经节中CNTF表达、降低JAK2/STAT3信号通路活化有关。

目的 通过16s rRNA测序技术探讨复方地黄颗粒对肺炎链球菌（Spn）诱导肺炎模型大鼠肠道菌群的影响，并阐明其潜在机制。 方法 将30只大鼠随机分为对照组（正常大鼠）、模型组（Spn诱导肺炎大鼠模型）、低剂量复方地黄颗粒组（肺炎大鼠模型灌胃1.75 g·kg^-1复方地黄颗粒）、中剂量复方地黄颗粒组（肺炎大鼠模型灌胃3.50 g·kg^-1复方地黄颗粒）和高剂量复方地黄颗粒组（肺炎大鼠模型灌胃7.00 g·kg^-1复方地黄颗粒），每组6只。测定大鼠肺组织湿/干重（W/D）比值并分析血气指标，HE染色观察各组大鼠肺组织病理形态表现并评估肺组织损伤程度，试剂盒检测各组大鼠肺泡灌洗液（BALF）中细菌负荷水平和白细胞介素（IL）-6、IL-8及IL-10水平，进行16s rRNA肠道菌群测序分析。 结果 与对照组比较，模型组大鼠动脉血二氧化碳分压（PaCO₂）明显升高（P<0.05），动脉血氧分压（PaO₂）和血氧饱和度（SaO₂）明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠PaCO₂明显降低（P<0.05），PaO₂和SaO₂明显升高（P<0.05），并呈剂量依赖性。HE染色，对照组大鼠肺组织未见明显损伤；模型组大鼠肺组织细胞排列紊乱，大量炎性细胞浸润，肺泡壁毛细血管明显扩张；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠肺组织形态损伤均有所改善。与对照组比较，模型组大鼠肺组织W/D比值和病理评分明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠肺组织W/D比值和病理评分明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性。与对照组比较，模型组大鼠BALF中细菌负荷水平明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠BALF中细菌负荷水平明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性。与对照组比较，模型组大鼠BALF中IL-6和IL-8水平明显升高（P<0.05），IL-10水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠BALF中IL-6和IL-8水平明显降低（P<0.05），IL-10水平明显升高（P<0.05），并呈剂量依赖性。与对照组比较，模型组大鼠菌群丰度指标（Chao1）、菌群多样性和均匀性指标（Shannon）、菌群优势度指标（Simpson）及实际检测物种数指标（Observed_species）均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠Chao1、Shannon、Simpson和Observed_species均明显升高（P<0.05），并呈剂量依赖性。与对照组比较，模型组大鼠拟杆菌门（Bacteroidetes）相对丰度降低，厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度升高，Firmicutes/Bacteroidetes比值明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠Bacteroidetes相对丰度升高，Firmicutes相对丰度降低，Firmicutes/Bacteroidetes比值明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性。在科水平上，与对照组比较，模型组大鼠棒状杆菌科（Corynebacteriaceae）、葡萄球菌科（Staphylococcaceae）和莫拉氏菌科（Moraxellaceae）相对丰度明显升高，而乳酸杆菌科（Lactobacillaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）和嗜黏蛋白阿克曼菌科（Akkermansiaceae）相对丰度明显降低；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠Corynebacteriaceae、Staphylococcaceae和Moraxellaceae相对丰度明显降低，Lactobacillaceae、Lachnospiraceae和Akkermansiaceae相对丰度明显升高。在属水平上，与对照组比较，模型组大鼠脱硫弧菌属（Desulfovibrio）和费克蓝姆氏菌属（Facklamia）相对丰度明显升高，双歧杆菌（Bifidobacterium）和瘤胃球菌属（Ruminococcaceae）相对丰度明显降低；与模型组比较，低、中和高剂量复方地黄颗粒组大鼠Desulfovibrio和Facklamia相对丰度明显降低，Bifidobacterium和Ruminococcaceae相对丰度明显升高。 结论 复方地黄颗粒可以改善Spn诱导的肺炎大鼠的炎症和肺损伤，这可能与肠道菌群丰度和多样性的增加有关。

目的 探讨过表达环状RNA（circRNAs）修饰牙髓干细胞（DPSCs）来源外泌体（Exo）促进人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管生成在牙髓血管再生中的作用，并阐明相关分子机制。 方法 分离乳齿源-、成人智齿源-和老年人恒牙源-原代DPSCs。流式细胞术检测3种原代DPSCs表面标志物蛋白阳性表达情况。使用3种来源的DPSCs与HUVECs建立共培养体系，将细胞分为乳牙源-原代DPSCs组、成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组。另将细胞分为Exo-OE vector组、Exo-circ_0026827 OE组和Exo-circRNA 124534 OE组，分别转染腺病毒介导的OE vector、circ_0026827 OE和circRNA124534 OE后，分离其细胞培养上清液Exo。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组HUVECs增殖活性，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组Exo中血管生成相关circRNAs表达水平，Western blotting法检测共培养细胞上清中Exo标志物相关蛋白表达水平。验证各组细胞Exo摄取情况，血管生成-诱导实验检测细胞上清液中Exo分离情况。 结果 大部分细胞表面标志物表达情况为白细胞分化抗原44（CD44）（+）、白细胞分化抗原34（CD34）（-）和基质细胞抗原1（Stro-1）（+），鉴定为原代DPSCs。CCK-8法检测，与乳牙源-原代DPSCs组比较，成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组共培养的HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01）；与成人智齿源-原代DPSCs组比较，老年人恒牙源-原代DPSCs组共培养的HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01）。3种共培养体系细胞培养上清液Exo中白细胞分化抗原9（CD9）、热激蛋白70（HSP70）和肿瘤易感基因101（TSG101）均表达阳性。3种共培养体系细胞上清液中Exo的粒径为50~110 nm。RT-qPCR法检测，与乳牙源-原代DPSCs组比较，成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组Exo中circRNA124534和circ_0026827 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）；与成人智齿源-原代DPSCs组比较，老年人恒牙源-原代DPSCs组Exo中circRNA124534和circ_0026827 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）；3组Exo中circ_信号诱导增殖相关基因1（SIPA1L1） mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。Western blotting法检测，与Exo-OE vector组比较，Exo-circ_0026827 OE组HUVECs中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、血管内皮生长因子A（VEGF-A）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、血管发生素1（Ang-1）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）；与Exo-OE vector组比较，Exo-circRNA124534 OE组HUVECs细胞中p-p38 MAPK、VEGF-A、VEGFR2、Ang-1、SDF-1和MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。各组HUVECs均成功摄取Exo。Exo-OE vector组HUVECs呈现较为平铺的生长状态；与Exo-OE vector组比较，Exo-circ_0026827 OE组和Exo-circRNA124534 OE组HUVECs呈现网状排列的生长状态，并有排列成管状的趋势。 结论 过表达circ_0026827和circRNA124534修饰乳牙DPSCs来源的Exo对HUVECs血管生成有一定促进作用。

目的 探讨钛表面电化学处理形成钒（V）和硅（Si）共掺杂TiO₂涂层（V-Si TiO₂）的最佳掺杂浓度，并评估其在可见光照射下的抗菌作用，阐明其可见光响应机制。 方法 将医用纯钛片采用微弧氧化后进行高温煅烧，通过调整电解液中V和Si比例制备不同掺杂浓度的V-Si TiO₂涂层，实验分为1V∶10Si（V5Si50）组、2V∶10Si（V10Si50）组和3V∶10Si（V15Si50）组，另设对照组（仅包含细胞培养基），结合表面形态表现、离子释放、光催化能力及生物相容性等评估筛选出最佳掺杂浓度，细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测各组细胞增殖活性和细胞存活率。通过扫描电子显微镜（SEM）、 原子力显微镜（AFM）、 数字涡流涂层测厚仪、 X射线衍射（XRD）、 X射线光电子能谱（XPS）和紫外-可见光吸收光谱（UV-vis）对优化涂层进行表征分析比较，实验分为PT组（空白对照）、PEO组（无元素掺杂）、V10组（V掺杂）、Si50组（Si掺杂）和V10Si50组（2V∶10Si），检测可见光下涂层材料降解亚甲基蓝（MB）的能力及活性氧（ROS）生成情况。抗菌实验选用金黄色葡萄球菌（S.aureus）和大肠杆菌（E.coli），分别对各组涂层样品进行可见光照2 h和黑暗处理2 h后记录各组平板菌落数，2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）ROS探针检测ROS水平，ROS清除实验选用最佳掺杂浓度V10Si50组。将2种细菌分为PT组、Ｎ-乙酰半胱氨酸（NAC）组、V10Si50组和NAC+V10Si50组，可见光照射2 h后记录各组平板菌落数。 结果 电解质溶液中V浓度0.01 mol·L^-1和Si浓度0.05 mol·L^-1为V-Si TiO₂涂层的最佳掺杂浓度。SEM观察，与V5Si50组和V15Si50组比较，V10Si50组涂层材料表面孔径明显减小（P<0.05），涂层厚度明显增加（P<0.05），其晶体结构主要为锐钛矿型，且可见光催化9 h后V10Si50组涂层材料MB降解率明显升高（P<0.05）。与对照组比较，细胞培养1、2和4 d时V10Si50组细胞增殖活性和细胞存活率均明显升高（P<0.05）；细胞培养2和4 d时，V5Si50组和V15Si50组细胞增殖活性和细胞存活率均明显降低（P<0.05）。与PT、PEO和Si50组比较，经过可见光照射2 h后V10组和V10Si50组2种细菌菌落数均明显降低（P<0.05）。与PT组和PEO组比较，光照2 h后V10Si50组2种细菌中ROS水平明显升高（P<0.05）。与V10Si50组比较，NAC+V10Si50组2种细菌菌落数明显增加（P<0.05）。 结论 筛选出合理负载化的V-Si TiO₂涂层材料（V10Si50），其可以保持良好生物活性且在可见光照射下显著增强抗菌效果。

目的 探讨早期记忆T淋巴细胞（T_M）在甲型流感病毒（H1N1）PR8感染小鼠后的变化情况，并阐明其意义。 方法 将32只C57BL/6小鼠随机分为对照组和流感病毒（PR8）组，每组16只。对照组小鼠鼻滴30 μL无菌磷酸盐缓冲液（PBS），PR8组小鼠给予鼻滴2 LD₅₀ PR8病毒液。于第10天处死小鼠，收集支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织和淋巴结用于后续实验。HE染色观察2组小鼠肺组织病理形态表现，血凝试验、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和免疫荧光法检测小鼠肺组织病毒感染情况，流式细胞术检测2组小鼠BALF、肺组织和淋巴结中T淋巴细胞、效应性T淋巴细胞、中央型T_M淋巴细胞（T_CM）和效应性T_M淋巴细胞（T_EM）及核蛋白（NP）/聚合酶酸性蛋白（PA）特异性T_EM淋巴细胞百分率。 结果 与对照组比较，PR8组小鼠肺组织出现明显的病理损伤，且肺组织病毒效价和NP蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。与对照组比较，PR8组小鼠BALF和肺组织中CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、效应性CD4⁺T淋巴细胞、效应性CD8⁺T淋巴细胞、CD4⁺T_EM淋巴细胞和CD8⁺T_EM淋巴细胞百分率均明显升高（P<0.01）。与对照组比较，PR8组小鼠BALF和肺组织中CD4⁺T_CM、CD8⁺T_CM、CD4⁺T_EM、CD8⁺T_EM及NP/PA特异性CD4⁺T_EM和CD8⁺T_EM淋巴细胞百分率均明显升高（P<0.05或P<0.01），淋巴结中CD8⁺T_CM淋巴细胞百分率明显升高（P<0.05）。 结论 流感病毒感染可诱导机体T淋巴细胞增殖分化为效应性T淋巴细胞，在呼吸道黏膜局部早期建立保守表位NP/PA的特异性T_M淋巴细胞。

目的 对弓形虫硫氧还蛋白20（Trx20）进行表达纯化、抗体制备和亚细胞定位分析，为弓形虫疫苗的研制提供参考。 方法 采用生物信息学相关网站及软件对Trx20蛋白进行生物信息学分析，设计特异性引物进行目的片段扩增和原核表达载体构建，进行蛋白质的体外表达和纯化。免疫实验动物进行抗体制备，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测多克隆抗体效价，Western blotting法验证抗体的特异性和灵敏度以及确定该蛋白的天然表达情况，间接免疫荧光法（IFA）分析蛋白的亚细胞定位。 结果 生物信息学分析，Trx20蛋白是一种较稳定的亲水性蛋白，分子式为C₂₁₇₂H₃₄₁₂N₅₄₈O₆₁₆S₂₀，含有424个氨基酸，预测相对分子质量为47 700，理论等电点为8.55；预测该蛋白存在1个信号肽，无跨膜区，含有1个名为“Thioredoxin like Superfamily”的结构域，并含35个磷酸化位点、1个N-糖基化位点和17个抗原决定簇；二级结构中α螺旋占氨基酸总数的41.51%，无规则卷曲占39.86%；成功构建重组质粒pET-28a-Trx20和pGEX-4T-1-Trx20，实现了可溶性重组蛋白的表达和纯化；成功制备多克隆抗体，效价高达1∶64 000，且对Trx20蛋白具有特异性识别能力；亚细胞定位，Trx20蛋白在虫体细胞质中广泛分布。 结论 刚地弓形虫Trx20蛋白是一种含有磷酸化/糖基化修饰位点和硫氧还蛋白结构域，且为定位于虫体胞质中的分泌型蛋白质。

目的 探讨盐酸小檗碱（BBR）对1型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染HeLa细胞自噬的影响，并阐明其相关机制。 方法 将处于对数生长期的HeLa细胞分别加入0、10、20、40、80、120和160 μmol·L^-1 BBR中培养24 h。另将HeLa细胞分为HSV-1组（感染HSV-1）、L-BBR组（感染HSV-1后，用20 μmol·L^-1 BBR处理24 h）、M-BBR组（感染HSV-1后，用40 μmol·L^-1 BBR处理24 h）、H-BBR组（感染HSV-1后，用80 μmol·L^-1 BBR处理24 h）和740 Y-P组（感染HSV-1后，用80 μmol·L^-1 BBR和10 μmol·L^-1 740 Y-P处理24 h），进行病毒感染及相应的药物处理。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测检测不同浓度BBR处理HeLa细胞活性，空斑减数实验检测各组HeLa细胞中HSV-1增殖能力，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组Hela细胞中病毒复制相关基因mRNA表达水平，免疫荧光法检测各组Hela细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）自噬小体形成情况，流式细胞术检测各组Hela细胞凋亡率，Western blotting法检测各组Hela细胞中自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白表达水平。 结果 MTT法检测，与0 μmol·L^-1 BBR组比较，120和160 μmol·L^-1 BBR组HeLa细胞活性明显降低（P<0.05），对细胞具有一定毒性；选择20、40和80 μmol·L^-1 BBR进行后续实验。空斑减数实验检测，与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞中空斑形成单位（PFUs）明显减少（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中PFUs明显增加（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组感染细胞蛋白0（ICP0）、感染细胞蛋白22（ICP22）、感染细胞蛋白8（ICP8）、胸苷激酶（TK）、糖蛋白B（gB）和糖蛋白D（gD）mRNA表达水平均明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中ICP0、ICP22、ICP8、TK、gB和gD mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。免疫荧光法检测，与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞中LC3自噬小体形成数量增加；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中LC3自噬小体形成数量减少。流式细胞术检测，与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞凋亡率明显升高（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测，与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞中苄氯素1（Beclin-1）及B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白（BNIP）蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显升高（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中Beclin-1和BNIP蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显降低（P<0.05）；与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中Caspase-1、Caspase-3和Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与HSV-1组比较，L-BBR组、M-BBR组和H-BBR组HeLa细胞中磷酸化PI3K（p-PI3K）/PI3K、磷酸化AKT（p-AKT）/AKT和磷酸化mTOR（p-mTOR）/mTOR比值均明显降低（P<0.05），并呈剂量依赖性；与H-BBR组比较，740 Y-P组HeLa细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR比值均明显升高（P<0.05）。 结论 BBR能够促进HSV-1病毒感染HeLa细胞的自噬过程，诱导自噬依赖性凋亡，并显著抑制病毒的复制，其作用机制与调控PI3K/AKT/mTOR通路有关。

目的 基于癌症基因组图谱（TCGA）数据库和临床样本的实验验证探讨肝细胞癌（HCC）中肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅱ型（INPP4B）基因的表达及临床意义。 方法 基于TCGA数据库中的424例临床样本数据资料（包括HCC组织374例，癌旁组织50例），采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析，评估INPP4B基因与HCC患者临床特征及生存预后的关系。分析INPP4B基因与24种免疫细胞数量，肿瘤组织中的基质、肿瘤组织中的免疫细胞浸润和肿瘤纯度，HCC高频突变基因肿瘤蛋白53（TP53）基因表达水平的相关性。收集2022年12月—2023年12月进行手术切除治疗的60例HCC患者临床病理资料及其组织石蜡切片，根据临床诊断分为低分化组（HCC-L组）、中分化组（HCC-M组）和高分化组（HCC-H组），每组20例，选取同时期20例取活检并病理诊断为非肿瘤患者的临床病理资料及其肝组织石蜡切片，作为正常组。HE染色观察各组研究对象HCC组织和正常肝组织病理形态表现，免疫组织化学法检测各组研究对象HCC组织和正常肝组织中Ki-67和INPP4B蛋白表达情况。 结果 与正常组织比较，HCC组织中INPP4B mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与INPP4B低表达组比较，INPP4B高表达组患者的总生存期（OS）均明显延长（P<0.05）。单因素Cox回归分析，肿瘤分期、病理分期、肿瘤状况和残余肿瘤对HCC患者OS存在影响（P<0.05）。单因素回归分析，INPP4B预后风险模型评分危险比（HR）=0.781，95%置信区间（CI）：0.552~1.105，P=0.168。INPP4B对HCC患者OS影响的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）值为0.558，表明INPP4B基因预后风险模型在HCC患者生存预后方面具有一定的预测价值。INPP4B mRNA表达水平与TNM分期、Stage分期、患者性别、年龄、种族和体质量指数（BMI）值均无相关关系（P>0.05）。高表达和低表达INPP4B的肿瘤组织中，22种免疫细胞存在统计学差异（P<0.05）；INPP4B mRNA表达水平与除辅助性T细胞（Th）17外的23种免疫细胞的数量均呈正相关关系（r>0），其中除自然杀伤细胞（NK）CD56⁺细胞外，均具有统计学意义（P<0.01）；INPP4B与肿瘤组织中的基质（r=0.475）、肿瘤组织中的免疫细胞浸润（r=0.641）和肿瘤纯度（r=0.599）均具有显著的相关性（P<0.01）。INPP4B与TP53存在相关性（r=0.287，P<0.01）。HE染色，正常组研究对象肝组织中可见肝小叶结构清晰、完整，细胞排列整齐，轻微炎性细胞浸润；HCC-L组、HCC-M组和HCC-H组患者HCC组织中可见肝小叶被完全破坏，肝细胞脂肪变性明显，炎性细胞大量浸润，部分细胞出现气球样变、小细胞性增生的病变，且HCC分化程度越低，组织破坏程度越严重；免疫组织化学法，与正常组比较，HCC-L组、HCC-M组和HCC-H组患者HCC组织中Ki-67蛋白表达水平均明显升高（P<0.01），且HCC组患者的分化程度越低，Ki-67阳性率越高。在正常组研究对象肝组织中可观察到细胞中棕褐色颗粒平均分布，INPP4B蛋白呈高表达；与正常组比较，HCC-L组、HCC-M组和HCC-H组患者HCC组织中INPP4B蛋白表达水平均明显降低（P<0.01），且HCC组织分化程度越低，INPP4B阳性率越低。 结论 INPP4B是HCC患者预后的保护因素，INPP4B作为一种新的抑癌基因，可能成为治疗HCC新药筛选的潜在靶标。

目的 探讨肥厚型心肌病（HCM）并发微循环功能障碍（CMD）患者的临床特征，分析并发CMD对HCM患者预后的影响。 方法 收集2019年1月1日—2023年9月30日诊断为HCM并有完整心脏磁共振成像（CMR）检查结果的患者211例。经CMR评定分为HCM并发CMD组68例，HCM未并发CMD组143例。比较2组患者年龄、性别、入院症状和既往史等临床资料及肌钙蛋白等血液相关检验资料，心电图、心脏彩超、CMR数据，包括异常Q波、压低ST段、倒置T波、PR间期、QRS波长、校正QT间期、射血分数（EF）、左心房内径（LAD）、左右心室舒张末期内径、心输出量、E峰、A峰和心肌最大肥厚程度（MWT）。采用Logistic回归分析HCM并发CMD患者的临床特征，多因素修正Poisson回归分析HCM患者出现主要不良心血管事件（MACE）的危险因素。 结果 与HCM未并发CMD组比较，HCM并发CMD组患者发生心悸患者百分率明显升高（P<0.05），发生心动过速患者百分率明显升高（P<0.05），肌钙蛋白水平明显升高（P<0.05），伴有高血压病史患者百分率明显降低（P<0.05）。与HCM未并发CMD组比较，HCM并发CMD组心电出现异常Q波患者百分率明显升高（P<0.05），心电出现倒置T波患者百分率和EF明显降低（P<0.05），LAD明显增大（P<0.05），MWT明显增加（P<0.05）。多因素Logistic回归分析，LAD增大［比值比（OR）=1.05，95%置信区间 （CI）：1.00~1.11，P=0.048）］和MWT增加（OR=1.11，95%CI：1.03~1.19，P=0.007）是HCM患者并发CMD的危险因素；高血压病史（OR=0.40，95%CI：0.20~0.80，P=0.010）是HCM患者并发CMD的保护性因素。本研究平均随访时间为20.5个月，共有27例患者发生MACE，总发生率为12.80%，其中HCM并发CMD组患者12例，未并发CMD组患者15例。多因素修正Poisson回归分析，糖尿病病史［相对危险度（RR）=2.34，95%CI：1.09~5.06，P=0.030）］、心律失常病史（RR=4.00，95%CI：1.82~8.83，P=0.001）和EF降低（RR=0.96，95%CI：0.94~0.99，P=0.001）是HCM发生MACE的危险因素。 结论 HCM并发CMD患者具有独特的临床特征，包括更高的症状负荷、左心房扩大、心肌肥厚和肌钙蛋白水平升高。并发CMD未增加短期不良事件风险，糖尿病、心律失常和EF降低是预后的关键危险因素，针对HCM并发CMD患者的早期干预和并发症管理可能改善HCM患者的长期预后。

目的 探讨钙激活氯通道蛋白1（ANO1）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）在结直肠癌（CRC）组织中的表达及其与CRC患者临床病理特征的关系，并阐明其临床意义。 方法 收集原发性CRC患者的手术组织样本77例。采用免疫组织化学（IHC）法检测CRC组织中ANO1和E-cadherin蛋白表达情况，采用Spearman相关分析法分析二者表达的相关性，采用PCR荧光探针法检测CRC组织中KRAS/NRAS突变情况，采用卡方检验或Fisher确切概率法分析ANO1和E-cadherin表达与CRC患者临床病理特征的关系。 结果 IHC法检测，CRC组织中ANO1阳性表达率为24.7%，E-cadherin阳性表达率为63.6%。Spearman法分析，CRC组织中ANO1与E-cadherin表达呈正相关关系（r=0.458，P<0.05）。肿瘤部位在结肠的CRC患者癌组织中ANO1阳性表达率明显高于肿瘤部位在直肠的患者（χ²=5.499，P=0.019）；TNM分期Ⅰ-Ⅱ期CRC患者癌组织中ANO1阳性表达率明显高于Ⅲ-Ⅳ期的患者（χ²=4.774，P=0.029）；无淋巴结转移的CRC患者ANO1阳性表达率明显高于有淋巴结转移的患者（P=0.034）。T1-T3期CRC患者E-cadherin阳性表达率明显高于T4期的CRC患者（P=0.024）。p53阴性、Ki-67<90%、PMS2阴性和KRAS突变型的CRC患者癌组织中ANO1阳性表达率明显高于p53阳性、Ki-67≥90%、PMS2阳性和KRAS野生型的CRC患者（P=0.031，P=0.036，P=0.048，P=0.028）。 结论 患者原发性CRC组织中ANO1与E-cadherin表达呈正相关关系，ANO1及E-cadherin与患者多个临床病理特征存在关联性，ANO1和E-cadherin可能参与CRC的发生和进展过程。

目的 探讨微波消融（MWA）与外科手术治疗桥本甲状腺炎（HT）并发T1aN0M0期甲状腺乳头状癌（PTC）的临床疗效，阐明MWA作为微创治疗手段的可行性和优势。 方法 采用回顾性队列研究方法，选取2018年1月—2020年12月确诊为HT并发T1aN0M0期PTC的患者165例，分为MWA组（82例）和外科手术组（83例）。MWA组患者在超声引导下进行MWA治疗，外科手术组患者接受甲状腺单侧叶切除术+单侧淋巴结清扫术。中位随访时间为（65.98\pm7.32）个月，记录并分析2组患者年龄、术前肿瘤体积、手术时间、术中出血量、住院时间、住院费用、肿瘤进展、术后并发症发生率、甲状腺功能变化、肿瘤复发率及患者生活质量评分等指标。 结果 2组患者年龄、性别和术前肿瘤体积、边缘、形状、纵横比、钙化及甲状腺功能等基线样本资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与外科手术组比较，MWA组患者手术时间、术中出血量、住院时间及住院费用差异有统计学意义（P0.01），术后并发症发生率差异无统计学意义（P>0.05）。MWA组患者所有结节在18个月内实现完全消融，术后功能性甲状腺实质保留良好，随访期间甲状腺功能均维持在正常生理范围。甲状腺癌特异性生活质量量表（THYCA-QoL）评分，与MWA组比较，外科手术组患者声音、交感神经症状、咽喉/口腔问题、心理、感觉问题、瘢痕和畏寒6个维度评分明显升高（P0.05）。2组患者肿瘤进展率比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 在中位随访期间，MWA和外科手术治疗HT并发T1aN0M0期PTC患者均取得了较为满意的临床疗效。MWA治疗在手术时间、术中出血量、住院时间、住院费用、生活质量和甲状腺功能保留等方面具有明显优势，可作为此类患者的微创治疗选择，但其远期肿瘤学安全性需延长随访进一步评估。

目的 探讨泛免疫炎症指数（PIV）在老年冠心病患者接受经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后1年内预测主要心血管不良事件（MACE）的临床价值，阐明炎症反应在冠心病患者术后恢复和预后中的作用。 方法 选取2020年7月—2023年8月接受PCI术治疗的150例老年冠心病患者作为研究对象，依据术后1年是否出现MACE分为MACE组（n=28）和未发生MACE组（n=122），采集患者基线资料和生化指标，并计算PIV，多因素Logistic回归分析老年冠心病患者PCI术后1年内发生MACE的影响因素，受试者工作特征（ROC）曲线分析PIV对老年冠心病患者PCI术后1年内发生MACE的预测价值。 结果 与未发生MACE组比较，MACE组患者总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平及中性粒细胞（NEUT）、血小板（PLT）计数和PIV均明显升高（P<0.05），2组患者其他资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析，TC（OR=1.571，95%CI：1.088~2.270）及LDL-C（OR=32.506，95%CI：8.880~118.994）水平和PIV（OR=1.014，95%CI：1.010~1.019）均为老年冠心病患者PCI术后1年发生MACE的影响因素（P<0.05）。ROC曲线分析，PIV预测MACE的ROC曲线下面积（AUC）值为0.857（95%CI：0.762~0.951），灵敏度为0.821，特异度为0.959，最大约登指数为0.780，最佳阈值为778.805（P<0.01）。 结论 PIV对老年冠心病患者PCI术后1年内发生MACE具有重要的预测价值。

目的 探讨微小RNA（miR）-125a-5p在感染结核分枝杆菌（MTB）患者外周血单个核细胞（PMBCs）中表达的差异及其对巨噬细胞CD80和CD206蛋白表达的影响，并阐明其临床意义。 方法 选择2022年7月—2023年6月就诊、经临床确诊的活动性结核病（ATB）感染者40例（ATB组），结核分枝杆菌潜伏感染（LTBI）患者35例（LTBI组）和健康体检者40名（对照组），禁食12 h后次日清晨分别采集3组研究对象空腹血样本，分离血清，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组研究对象血清中炎症因子水平，同时提取各组PBMCs，采用流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD80和CD206蛋白表达水平，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组研究对象PBMCs中miR-125a-5p和白细胞介素6（IL-6）mRNA表达水平。 结果 3组研究对象年龄一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，ATB组和LTBI组患者血清中血沉（ESR）、单核细胞（MONO）百分比、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）水平均明显升高（P<0.05），淋巴细胞（LY）百分比明显降低（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者血清中ESR和IL-10水平均明显降低（P<0.05），LY百分比明显升高（P<0.05）；白细胞（WBC）计数组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。流式细胞术检测，与对照组比较，ATB组和LTBI组患者PBMCs中CD80和CD206蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者PBMCs中CD206蛋白表达水平明显升高（P<0.05），CD80蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与对照组比较，ATB组和LTBI组患者PBMCs中miR-125a-5p和IL-6 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者PBMCs中miR-125a-5p和IL-6 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。相关性分析，miR-125a-5p表达水平与TNF-α水平和IL-6 mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.406，P<0.05；r=0.351，P<0.05），与IL-10水平呈负相关关系（r=－0.368，P<0.05）。miR-125a-5p表达水平诊断LTBI患者的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）值为0.89（P<0.01），灵敏度为0.85，特异度为0.88。 结论 miR-125a-5p在LTBI组患者PBMCs中表达水平明显升高，其可影响巨噬细胞向M1极化，促进巨噬细胞炎症反应过程，参与肺结核的发生发展。

目的 分析乳腺癌相关参数及腋窝淋巴结阳性超声特征，探讨腋窝淋巴结转移负荷的危险因素，为乳腺癌患者术前评估提供依据。 方法 回顾性分析经手术病理证实存在腋窝淋巴结转移的574例乳腺癌患者的超声和临床病理资料，根据腋窝淋巴结转移情况，分为低淋巴结负荷（LNB）组（n=283）和高淋巴结负荷（HNB）组（n=291）。比较2组患者患侧、肿物所在象限、距皮肤距离、最大径线、内部回声、形态、边缘、钙化、血供、后方回声、淋巴结长径、淋巴结短径、淋巴结纵横比、可疑转移数量、淋巴结内血供、淋巴结门形态、年龄、病理类型、组织学分级、分子分型及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、Ki-67、人表皮生长因子受体2（HER2）和P53表达情况。采用Logistic回归分析乳腺癌患者腋窝淋巴结转移负荷的危险因素，采用受试者工作特征（ROC）曲线和曲线下面积（AUC）评价预测价值。 结果 单因素分析，2组患者肿物所在象限、距皮肤距离、分子分型、HER2阳性表达、淋巴结长径、淋巴结短径、淋巴结纵横比、可疑转移数量和淋巴结门形态比较差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析，肿物位于外上象限（OR=0.648，P=0.021）、距皮肤距离<5 mm（OR=0.283，P=0.016）、Luminal A（OR=1.564，P=0.044）、淋巴结长径≥20 mm（OR=2.050，P<0.01）、淋巴结短径≥8.6 mm（OR=2.430，P<0.01）、淋巴结纵横比<2（OR=1.585，P<0.01）和淋巴结门形态不清晰（OR=2.092，P<0.01）是腋窝淋巴结转移负荷的独立危险因素。ROC曲线分析，与腋窝淋巴结阳性超声特征比较，乳腺癌相关参数联合腋窝淋巴结阳性超声特征的AUC较大（Z=2.72，P=0.006 5），对腋窝淋巴结转移负荷的预测价值更高。 结论 乳腺癌所在象限、距皮肤距离、分子分型、淋巴结长径、淋巴结短径、淋巴结纵横比和淋巴结门形态是腋窝淋巴结转移负荷的独立危险因素，对腋窝淋巴结转移负荷有一定预测价值。

目的 探讨贝利尤单抗治疗系统性红斑狼疮（SLE）的临床应用效果及对患者外周血分化簇40（CD40）和CD40配体（CD40L）表达的影响，为SLE的有效治疗提供理论依据。 方法 回顾性分析本院收治的150例SLE患者的临床资料，按治疗方法将患者分为常规治疗组（接受标准治疗方案，78例）和贝利尤单抗组（在标准治疗方案基础上加用贝利尤单抗，72例）。比较2组患者疗效及不良反应，并分析2组患者治疗前后临床症状、器官受累情况、疾病活动度、泼尼松用量、外周血单核细胞中CD40和CD40L mRNA表达水平及免疫学相关指标水平。 结果 与常规治疗组比较，贝利尤单抗组患者治疗后总有效率和补体C3及补体C4水平均明显升高（P<0.01或P<0.001），肾脏受累比例、SLE疾病活动指数-2K（SLEDAI-2K）评分、泼尼松用量、免疫球蛋白G（IgG）水平及外周血单核细胞中CD40和CD40L mRNA表达水平均明显降低（P<0.01或P<0.001）。2组患者治疗期间不良反应总发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 贝利尤单抗可提高SLE治疗有效率，降低疾病活动度，减少肾脏受累和激素用量，且安全性良好，其作用机制可能与下调外周血中CD40和CD40L表达及改善免疫功能有关。

局限期小细胞肺癌（SCLC）是一种恶性程度高、进展快的神经内分泌肿瘤，尿毒症为慢性肾衰竭终末期并发症，SCLC并发尿毒症患者治疗耐受性差，抗肿瘤治疗方案选择受限，诊疗难度大。本研究分析1例69岁男性局限期SCLC并发尿毒症患者（既往规律血液透析，每周3次），探讨其一线治疗方案、疗效及血液透析对抗肿瘤药物血浆浓度的影响，并结合相关文献进行复习，为同类患者治疗提供参考。患者因咳嗽、咯血半月入院，经计算机断层扫描（CT）及肺穿刺活检确诊为局限期SCLC ⅢA期（T2aN2M0）。经多学科诊疗（MDT）团队讨论后，患者接受6个周期依托泊苷（VP-16）+卡铂化疗联合阿得贝利单抗免疫治疗，序贯阿得贝利单抗维持治疗。疗效评价为部分缓解且持续缓解中，治疗期间出现4级血红蛋白下降、3级中性粒细胞减少及2级白细胞减少，对症处理后缓解。血药浓度检测结果提示，药物输注时依托泊苷和卡铂血浆浓度快速上升，输注结束后血浆药物浓度逐渐降低。血液透析可快速降低卡铂血浆浓度，对依托泊苷血浆浓度无明显影响。因此，免疫联合减量化疗方案治疗该类患者安全有效，血浆药物浓度检测可观察药物代谢，但检测最佳时间点及临床价值需进一步研究验证。

坏疽性脓皮病（PG）是一种罕见的自身炎症性疾病，以疼痛性和坏死性皮肤溃疡为主要特征。PG病因未明，治疗也颇具挑战。现报道1例阿达木单抗联合托法替布成功治疗复发性坏疽性脓皮病的病例，同时进行相关文献综述。患者，男性，54岁，因阴囊溃疡伴疼痛20 d、加重累及腹股沟区5 d且发热1 d就诊。皮肤科检查情况：阴囊见2处疼痛性溃疡，边缘隆起，边界清楚，表面少许脓性分泌物；右侧腹股沟区及左股内侧可见不规则浸润性红斑块，其上散在簇集性脓疱，中央坏死，呈紫褐色，周围绕以红晕，境界清楚。结合患者既往病史、临床表现及辅助检查，诊断符合坏疽性脓皮病。患者经阿达木单抗联合托法替布治疗后，症状明显改善，溃疡愈合。6个月后随访，皮损未复发。对于传统治疗无效的难治性PG，阿达木单抗联合托法替布是一种有效且安全的治疗选择，为PG治疗提供了新的联合治疗方案。

滤泡亚型甲状腺乳头状癌（FVPTC）多见于中青年女性，儿童及青少年病例较为罕见。FVPTC主要驱动基因为RAS癌基因家族或B-Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（BRAF），DICER1基因突变在该亚型中少有报道。本文作者报道1例青少年DICER1突变阳性的复发性FVPTC病例，旨在为FVPTC的临床诊治提供参考。患者，女性，19岁，5年前因甲状腺结节行甲状腺全切术和中央组淋巴结清扫术，病理诊断为甲状腺恶性潜能未定的滤泡性肿瘤（FT-UMP），术后未遵医嘱规律行促甲状腺激素（TSH）抑制治疗及复查。2个月前，患者因颈部淋巴结肿大来院就诊，影像学提示肿瘤复发并伴双肺及椎骨转移，多基因检测提示DICER1基因突变。综合多学科会诊意见后行双侧颈淋巴结清扫术，术后病理明确诊断为转移型FVPTC。临床医生应关注FVPTC患者DICER1等罕见基因突变，对于青少年患者应重视随访和制订个体化治疗方案，实现肿瘤早期识别和精准干预，改善患者的长期预后。

目的 构建鞘氨醇激酶1（SPHK1）过表达慢病毒载体，建立SKOV3慢病毒稳定转染细胞系。 方法 根据美国生物技术信息中心（NCBI）数据库提供的SPHK1的数据信息设计并合成引物，扩增目的基因，连接至经BamHⅠ和AgeⅠ限制性内切酶处理的GV492质粒，构建SPHK1过表达慢病毒载体，选取阳性克隆进行PCR和测序鉴定。将慢病毒质粒和慢病毒包装辅助质粒共同转染至HEK-293T细胞进行包装和滴度测定。根据测得的最佳感染复数（MOI）为10，将各组相应的慢病毒量转染至SKOV3细胞，分为空白组（不进行处理）、GV492对照组（GV492对照慢病毒感染SKOV3细胞）和GV492-SPHK1过表达组（GV492-SPHK1过表达慢病毒感染SKOV3细胞，ov-SPHK1组）。使用最佳浓度为2 mg·L^-1的嘌呤霉素筛选稳定转染的SKOV3细胞系，48 h后换液，更换浓度为1 mg·L^-1嘌呤霉素筛选14 d，荧光显微镜下观察细胞形态和荧光表达情况。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组SKOV3细胞中SPHK1 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组SKOV3细胞中SPHK1蛋白表达水平。 结果 PCR测序，SPHK1过表达慢病毒载体基因序列与目标序列完全一致，成功构建SPHK1过表达慢病毒载体，GV492对照组和ov-SPHK1组慢病毒滴度分别为5×10¹¹及8×10¹¹ TU·L^-1。GV492对照组和ov-SPHK1组SKOV3细胞状态良好，荧光表达强烈，提示成功构建SPHK1过表达的SKOV3稳定转染细胞系。RT-qPCR法检测，与空白组和GV492对照组比较，ov-SPHK1组SKOV3细胞中SPHK1 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测，与空白组和GV492对照组比较，ov-SPHK1组SKOV3细胞中SPHK1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。 结论 成功构建了SPHK1过表达慢病毒载体，并建立了稳定转染的SKOV3细胞。

目的 构建柯萨奇病毒A16型（CA16）病毒病毒蛋白1（Vp1）的原核表达载体，并在大肠杆菌（E.coli）BL21中进行表达，纯化蛋白后制备兔多克隆抗体并对抗体免疫反应性进行鉴定。 方法 利用生物信息学在线工具对Vp1蛋白氨基酸组成、保守结构域、二级和三级结构进行预测。扩增CA16的Vp1基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a（+）中。将pET28a-Vp1转化E.coli BL21，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。采用Western blotting法鉴定Vp1蛋白诱导表达情况，并优化诱导时间和温度以提高表达效率。取2只雌性SPF新西兰大白兔，将纯化的重组蛋白Vp1免疫兔，制备兔抗Vp1蛋白多克隆抗体，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定抗体效价，Western blotting法对抗体的免疫反应性进行鉴定。 结果 生物信息学分析，Vp1基因编码297个氨基酸，相对分子质量为33 046.39，等电点为8.32，属于亲水性蛋白；二级结构中α-螺旋占15.15%，无规则卷曲占67.68%，延伸链占17.17%。重组质粒pET28a-Vp1测序，pET28a-Vp1质粒构建正确。Western blotting法检测，IPTG诱导组于相对分子质量33 000处有目的蛋白表达，目的蛋白主要表达于包涵体中。蛋白最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.4 mmol·L^-1、温度16 ℃和诱导时间20 h。ELISA法检测，兔多克隆抗体效价为1∶1 024 000。Western blotting法检测，Vp1兔多克隆抗体可以与CA16感染细胞中的病毒Vp1蛋白结合。 结论 成功制备出抗CA16 Vp1的多克隆抗体，该抗体对CA16 Vp1具有明显的结合特性，可用于肠道病毒感染的诊断及治疗方法的开发。

情绪失调（ED）是孤独症谱系障碍（ASD）儿童的常见问题，对社交、学业成就、亲子关系和整体功能会产生不良影响。ASD儿童共患的ED容易与其核心症状混淆或被忽视，从多个角度评估ASD儿童的情绪调节（ER）问题有助于早期识别和诊断ED，可为制订改善ASD儿童ED甚至整体预后的干预方法提供参考。探讨ASD儿童ED的非药物及药物治疗方法的应用，有助于为不同亚群ASD儿童的ED选择合适的干预策略，也可为更适用于幼儿和学龄前期ASD儿童ED的干预方法提供依据。现结合国内外相关研究成果，从ED的现状、评估方法和干预策略等方面介绍ASD儿童共患ED的研究进展，以期为ASD儿童ED的早期识别、诊断及有效干预提供更多科学依据。

RNA裂解型脱氧核酶是一类具有催化RNA切割活性的DNA分子，其能够以高特异性切割任意RNA底物，并具有高特异性、对基因组无永久影响、设计简单和序列可编程等优点，在生物传感以及疾病治疗方面具有巨大潜力。但脱氧核酶在体内或复杂生物环境中的脱靶激活问题限制了其在应用中的灵敏度和选择性。目前研究主要集中于脱氧核酶的化学修饰改造，通过引入特定的化学基团，来实现对其催化活性的精确控制，并通过将脱氧核酶与适配子结合，以实现其对目标分子的精确识别和高效切割。脱氧核酶序列经过设计后，可用于逻辑运算及分子计算机的开发。现概述脱氧核酶的多种改造和设计方法，结合近年经化学修饰、结构改造的RNA裂解脱氧核酶在疾病治疗及传感领域的应用实例，阐述其在生物传感和基因治疗中的独特性及优越性。探讨RNA裂解脱氧核酶在疾病诊断和治疗中的作用，旨在为该类脱氧核酶在相关领域的进一步应用提供参考。

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率仅次于宫颈癌，严重威胁女性生命健康，且发病呈年轻化趋势。目前，子宫内膜癌的治疗方式主要为手术治疗，部分术后患者及术后复发患者需行辅助放射治疗。盆腔外照射（EBRT）及阴道近距离放射治疗（VBT）为术后放射治疗的2种方式，需根据个体情况及指南推荐，为患者选择合适的术后放射治疗方式。多数患者通过手术及术后辅助放射治疗，能够取得理想的治疗效果。然而，子宫内膜癌患者术后放射治疗的具体适应证及术后复发患者的放射治疗原则较为复杂，不同指南推荐的术后患者放射治疗方式也略有不同。现对近年来子宫内膜癌患者的治疗原则、术后和术后复发放射治疗适应证及放射治疗方式进行综述，旨在为子宫内膜癌患者的放射治疗提供参考。

皮肤病严重影响全球约1.9亿患者的生活质量，其疾病表现的复杂性和多样性是传统诊疗模式面临的挑战，探索新型的诊断手段已经成为当前亟待解决的关键任务。深度学习（DL）技术在皮肤病智能识别领域已逐渐广泛应用，并显示出巨大的潜力。本文从三大维度系统综述了DL在皮肤病诊断中的研究进展。首先，在数据输入层面，重点分析皮肤镜图像、超声影像及病理切片图像多模态数据的特征提取与预处理方法。其次，在算法模型层面，深入探讨集成学习框架、多模态数据融合策略、多中心数据集协同训练方法及可解释性模型构建方案。最后，在任务识别层面，评估DL模型在良性皮肤病筛查、恶性皮肤病鉴别以及二分类与多分类诊断任务中的性能表现。通过多角度评述皮肤病DL诊断模型的研究为未来模型的进一步优化与应用提供参考。

去泛素化酶是蛋白质泛素系统中的重要水解酶，通过逆转泛素化调控蛋白泛素化和去泛素化的动态平衡，在调节蛋白质稳定性、细胞信号转导和细胞凋亡等生物过程中发挥重要作用。卵巢肿瘤结构域蛋白酶（OTU）域泛素醛结合蛋白2（OTUB2）作为去泛素化酶家族成员，通过调节多种底物的泛素化水平，在DNA损伤、信号转导、细胞代谢和肿瘤发生发展中发挥关键作用。OTUB2可在多种癌症中异常表达，且作为调控因子影响癌细胞的生长发育、增殖、迁移及侵袭，与癌症患者的预后有密切关联，可能成为一种新型癌症治疗靶点和预后生物标志物。目前关于OTUB2单一分子机制的研究较多，但针对其在癌症中作用的综述类报道较少。现基于国内外有关OTUB2的研究成果，对OTUB2的生物学功能、相关信号通路及其在癌症研究中的最新进展进行综述，分析OTUB2在癌症患者治疗和预后评估中的应用，为未来针对OTUB2的研究提供新思路。