人α1微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定

doi:国家高技术研究发展计划(863计划)资助课题(

人α₁微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定

王建秋¹，闫风琴²，张赢予¹，李友筑¹，颜炜群1

（1.吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室，吉林长春 130021；2.吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春 130021）

收稿日期:2006-08-28 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-07-28 发布日期:2007-07-28
通讯作者: 颜炜群

Cloning and identification of humanα₁-microglobulin/bikunin precursor cDNA

WANG Jian-qiu¹，YAN Feng-qin²,ZHANG Ying-yu¹,LI You-zhu¹,YAN Wei-qun1

1.Department of Biochemistry,Institute of Frontier Medical Sciences,Jilin University,Changchun 130021,China; 2.MH Radiobiology Research Unit,School of Public Health,Jilin University,Changchun 130021,China）

Received:2006-08-28 Revised:1900-01-01 Online:2007-07-28 Published:2007-07-28
Contact: YAN Wei-qun

摘要/Abstract

摘要： 目的：从人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA中钓取α₁微球蛋白/bikunin前体（AMBP）cDNA序列，构建其重组克隆载体。方法：采用Trizol法提取人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA，以此为模板，应用RT-PCR技术扩增目的基因，构建重组载体pMD18-T-ambp。采用蓝白筛选，经限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。结果：RT-PCR显示，仅从肝组织RNA中扩增出ambp基因片段，而肾和胰腺组织中均未检测出其mRNA的转录。构建的重组载体经SalⅠ/EcoRⅠ双酶消化得到1 098 bp大小的片段，与人AMBP cDNA片段大小一致。序列分析结果显示，克隆到载体中的目的基因与GenBank上登录的人AMBP cDNA序列完全一致。结论：从人胚胎肝组织RNA中成功钓取了AMBP cDNA序列，并正确构建其克隆载体pMD18-T-ambp。

关键词: pMD18-T-ambp, 克隆载体, 逆转录聚合酶链反应

Abstract: To obtain the cDNA sequence encoding human α₁-microglobulin/bikunin precursor (AMBP),and construct its recombinant cloning vector. Methods RNA was extracted from human embryo tissues of liver,kidney and pancreas with Trizol reagent.The sequence of human AMBP cDNA was cloned by RT-RCR from those RNAs,and inserted to pMD18-T vector.The recombinant vector pMD18-T-ambp was identified by restriction endonucleases SalⅠ/ EcoRⅠand DNA sequencing.Results The ambp gene fragment was obtained by RT-PCR only from liver RNA,but not from kidney and pancreas.A DNA fragment of 1 098 bp,consistent with the size of ambp gene fragment,was generated by digesting the recombinant plasmid with the restriction enzymes SalⅠ/EcoRⅠ.The results of sequence analysis showed that the constructed AMBP cDNA sequence was identical to the published one in GenBank. Conclusion The human AMBP cDNA is obtained successfully and the recombinant cloning vector pMD18-T-ambp is constructed correctly.

Key words: pMD18-T-ambp, cloning vectors, reverse transcriptase polymerase chain reaction

中图分类号:

王建秋，闫风琴，张赢予，李友筑，颜炜群. 人α₁微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定[J]. J4, 2007, 33(4): 634-637.

WANG Jian-qiu，YAN Feng-qin,ZHANG Ying-yu,LI You-zhu,YAN Wei-qun. Cloning and identification of humanα₁-microglobulin/bikunin precursor cDNA[J]. J4, 2007, 33(4): 634-637.

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人α₁微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定

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