抗大肠癌siRNA载体上报告基因的构建与鉴定
张春福1，宋 燕1，谭 岩2，刘力华2， 刘立民3，陈 丽4，孙志奇4
- 1.吉林大学中日联谊医院基本外科，吉林 长春 130033；2.吉林大学第一医院中心实验室，吉林 长春 130021；3.吉林大学中日联谊医院泌尿外科，吉林 长春 130033；4.大庆油田总医院集团心内科，黑龙江 大庆 163001
Construction and identification of recombinant expression vector pSilencer3.1-H1/GFP of siRNA against colorectal carcinoma
摘要： 目的：在siRNA载体上构建带绿色荧光蛋白（GFP）的报告基因，此重组质粒用于抗大肠癌的进一步研究。方法：用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白基因与真核细胞表达载体pSilencer3.1-H1的重组体（pSilencer3.1-H1/GFP），并用脂质体介导的转染技术，将其导入人大肠癌细胞。结果：GFP基因的PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可见目的片段大小与预期一致。重组pGEM-GFP克隆插入序列经测序鉴定结果与GenBank报道一致。重组质粒pSilenc er3.1-H1/GFP用NruⅠ和PstⅠ双酶切后可见2条电泳带， 3 500 bp为pSilencer3.1-H1 质粒片 段，700 bp左右为GFP片段，以PCR分析此插入序列也获得约700 bp的泳带，与预期一致。此重组质粒转染大肠癌细胞后，在倒置荧光显微镜下可见视野内发绿色荧光的细胞。结论：成功构建了含报告基因的重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP，此重组质粒可进一步用于抗大肠癌的研究，方便转染效率的直观观察，有利于流式细胞仪的检测。
中图分类号:
- R735.3