rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化

doi:国家高技术研究发展计划（863计划）资助课

rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化

韩冬¹，徐煌²，张新民¹，姜爽³，张婷¹，关铭⁴，颜炜群¹

1.吉林大学药学院生物工程教研室，吉林长春 130021；2.嘉兴学院医学院生物化学教研室，浙江嘉兴 314001；3.北华大学药学院药物分析教研室，吉林吉林 132001；4.吉林大学药学院药物分析教研室，吉林长春 130021

收稿日期:2007-12-26 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-05-28 发布日期:2008-05-28
通讯作者: 关铭，颜炜群

Large-scale fermentation and purification of rhHSP110 in Pichia pastoris

HAN Dong¹,XU Huang², ZHANG Xin-min¹, JIANG Shuang³,ZHANG Ting¹,GUAN Ming⁴, YAN Wei-qun¹

1.Department of Bioengineering, School of Pharmacy, Jilin University,Changchun 130021,China;2.Department of Biochemistry, Medical College of Jiaxing Univeristy,Jiaxing 314001,China;3.Department of Drug Analysis, School of Pharmacy, Beihua University,Jilin 132001,China;4.Department of Drug Analysis, School of Pharmacy, Jilin University,Changchun 130021,China

Received:2007-12-26 Revised:1900-01-01 Online:2008-05-28 Published:2008-05-28
Contact: GUAN Ming, YAN Wei-qun

摘要/Abstract

摘要： 目的：探讨重组人HSP110（rhHSP110）毕赤酵母工程菌在80 L发酵罐中大规模发酵的工艺及发酵产物rhHSP110的纯化方法。方法：在摇瓶中制备rhHSP110工程菌种子2 L，将种子接种到80 L发酵罐中，采用补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件,经历72 h后结束发酵。将发酵液离心，经阳离子交换层析对上清中的表达产物进行纯化。结果：控制发酵温度为30℃ ，pH值为4.2，溶氧值为20%以上，在酵母细胞湿重达到200 g•L^-1时开始甲醇诱导表达，72 h后结束发酵。发酵上清通过阳离子交换层析纯化后获得纯度为80%的rhHSP110，产量为500 mg•L^-1。结论：rhHSP110酵母工程菌在80 L发酵罐高密度发酵成功，为rhHSP110的产业化生产及临床研究了奠定基础。

关键词: 毕赤酵母, 发酵

Abstract: Abstract:Objective To study large-scale fermentation of recombinant human HSP110(rhHSP110) in Pichia pastoris, and the purification of expressed target protein in Pichia pastoris.Methods rhHSP110(2 L) was prepared in shake flask.Using fed-batch fermentation,the high-density fermentation of genetically engineered Pichia pastoris was processed in a 80 L bioreactor.After induction for 72 h, the target protein was purified by SP Sepharose XL.Results The fermentation temperature was set at 30℃,the pH value was 4.2, and the DO was kept over 20%.When the wet weight of the cells reached 200 g•L^-1, the methanol-induced phase was initiated.By cation exchange chromatography it was possible to purify the rhHSP110 produced in Pichia pastoris, and a yield of about 500 mg•L^-1 was reached.Conclusion The success of large-scale fermentation lays a foundation for mass production and clinical applications of rhHSP110.

Key words: Pichia, fermentation

中图分类号:

韩冬，徐煌，张新民，姜爽，张婷，关铭，颜炜群. rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化[J]. J4, 2008, 34(3): 385-388.

HAN Dong,XU Huang, ZHANG Xin-min, JIANG Shuang,ZHANG Ting,GUAN Ming, YAN Wei-qun. Large-scale fermentation and purification of rhHSP110 in Pichia pastoris[J]. J4, 2008, 34(3): 385-388.

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