J4

• 技术交流 • 上一篇    下一篇

一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立

杨春伟,孙妙囡*,孙德军   

  1. (吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室,吉林 长春 130021)
  • 收稿日期:2007-12-21 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-09-28 发布日期:2008-09-28
  • 通讯作者: 孙德军

Establishment of method of rapid, simple, efficient and economic recovery of DNA fragment

  • Received:2007-12-21 Revised:1900-01-01 Online:2008-09-28 Published:2008-09-28

摘要: 目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DN片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5~2.0 mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30 min 前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30 min 回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1 h;在5 000 r•min-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5 000 r•min-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10 000 r•min-1 (约合10 000 g);以10 000 r•min-1离心,30 min前,离心时间对回收率影响较大,至30 min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加; 250~2 000 bp 长度DNA片段,回收率为80.7%~88.4%,即使100 bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论: 硅化晴纶纱厚度0.5~2.0 mm,冻融时间≥1 h,离心力≥10 000 g,离心时间30 min DNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。

关键词: 回收, 硅化晴纶纱

中图分类号: 

  • Q503