丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达

doi:卫生部博士点专项基金资助课题(20040183047

丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达

苏秀芬，姜艳芳，王峰，牛俊奇

（吉林大学第一医院感染症科，吉林长春130021）

收稿日期:2008-05-08 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-11-28 发布日期:2008-11-28
通讯作者: 牛俊奇

Construction of eukaryotic expression vector containing hepatitis C virus NS

Received:2008-05-08 Revised:1900-01-01 Online:2008-11-28 Published:2008-11-28

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体，并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达，为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法：从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1（+）/ NS345中扩增出HCV NS5A基因片段，构建pCI-neo/ NS5A重组表达质粒。用脂质体将其转染HL-7702细胞，通过Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白。结果：用PCR方法扩增的HCV NS5A基因全长1 344 bp,与PGEM-T重组，测序证实所克隆的NS5A基因片段大小正确；成功地构建pCI-neo/ NS5A重组表达质粒，瞬时转染HL-7702细胞表达NS5A蛋白，Western blotting印迹法显示其相对分子质量约为56 000。结论：HCV NS5A的真核表达载体pCI-neo/ NS5A在HL-7702细胞中能有效表达NS5A蛋白，NS5A蛋白可导致病毒复制、肝细胞癌发生，且NS5A区为IFN敏感性决定区。

中图分类号:

R512.63

苏秀芬，姜艳芳，王峰，牛俊奇. 丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达[J]. J4, 2008, 34(6): 1092-1095.

[1]	孟祥伟,吴扬，孙逊，刘军，唐彤宇，迟宝荣. 慢性丙型肝炎及肝硬化患者血清中干扰素α/β受体蛋白的测定[J]. J4, 2005, 31(6): 946-948.
[2]	孔文丽, 杨以良, 徐洪芹, 彭姗姗, 华瑞, 潘煜, 牛俊奇. 慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗中肝功能与病毒学应答的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 99-103.