rhKPI/AβPP大规模发酵及纯化工艺

doi:国家高技术研究发展计划（863计划）资助课

rhKPI/AβPP大规模发酵及纯化工艺

贺巾超¹，杨莉莉¹，马杰¹，颜波群²，韩树海¹，侯立中¹，颜炜群^1*

1. 吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室，吉林长春130021；2. 吉林大学第四医院消化内科，吉林长春130011

收稿日期:2005-09-12 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-03-28 发布日期:2006-03-28
通讯作者: 颜炜群^1*

Large scale fermentation process and purification for rhKPI/AβPP in Pichia pastoris

HE Jin-chao¹, YANG Li-li¹, MA Jie¹, YAN Bo-qun² ，HAN Shu-hai¹，HOU Li-zhong¹,YAN Wei-qun^1*

1. Department of Biochemistry, Institute of Frontier Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021,China;2. Department of Digestive Medicine,Fourth Hospital,Jilin University, Changchun 130011,China

Received:2005-09-12 Revised:1900-01-01 Online:2006-03-28 Published:2006-03-28
Contact: YAN Wei-qun^1*

摘要/Abstract

摘要： 目的：在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达AβPP中的Kunitz型蛋白酶抑制剂的结构域（KPI/AβPP），利用80 L的发酵罐优化发酵条件，制备rhKPI/AβPP。方法：克隆kpi基因插入到pPICZα，构建真核表达载体pPICZα-kpi,经核酸测序确证后，电转化毕赤酵母菌株X-33，筛选高表达rhKPI/AβPP工程菌。结果：筛选出的高表达工程菌采用80L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵，在pH 3.3、纯氧浓度22％~30％、罐内压力为12psi、甲醇诱导60 h时产量1.0 g·L^-1。纯化的rhKPI/AβPP经SDS-PAGE分析显示单一区带，相对分子质量6 750。质谱测定其相对分子质量为6 750，抑制胰蛋白酶的比活性为8.4 EPU·mg^-1。结论：克隆、构建、筛选出高效表达rhKPI/AβPP的毕赤酵母工程菌，并建立了稳定的发酵和纯化工艺。

关键词: AβPP, 毕赤酵母, 发酵

Abstract: Objective To study the efficient expression of a Kunitz-type protease inhibitor(KPI) domain of the Alzheimer′s disease related to amyloid β-protein precursor, and produce rhKPI/AβPP by optimizing fermentation papameters on large scale using Pichia pastoris as host system. Methods KPI/AβPP gene was inserted into expression vector pPICZα and the resulted recombinant vector was transformed into the Pichia pastoris. Then KPI/AβPP was expressed in 80L fermentor with optimizing parameters and the broth was harvested and purified with SP Sepharose. Results KPI/AβPP gene could be induced by methanol and expressed with the maximal yield of 1.0 g·L^-1. The expressed product was purified from the fermentating culture. Analytic results revealed that resulted product with relative molecular mass of about 6 750 inhibited the serine protease activities. Conclusion rhKPI/AβPP can be expressed in Pichia pastoris on large scal. A stable fermentation and purification technology is successfully set up.

Key words: AβPP , Pichia, fermentation

中图分类号:

贺巾超，杨莉莉，马杰，颜波群，韩树海，侯立中，颜炜群. rhKPI/AβPP大规模发酵及纯化工艺[J]. J4, 2006, 32(2): 278-281.

HE Jin-chao, YANG Li-li, MA Jie, YAN Bo-qun ，HAN Shu-hai，HOU Li-zhong,YAN Wei-qun. Large scale fermentation process and purification for rhKPI/AβPP in Pichia pastoris[J]. J4, 2006, 32(2): 278-281.

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