双酚S和双酚F对雄性生殖系统损伤信号通路的生物信息学分析及其实验验证

doi:10.13481/j.1671-587X.20250220

吉林大学学报(医学版) ›› 2025, Vol. 51 ›› Issue (2): 460-470.doi: 10.13481/j.1671-587X.20250220

• 临床研究 • 上一篇

双酚S和双酚F对雄性生殖系统损伤信号通路的生物信息学分析及其实验验证

石雨¹,李景芝²,陈洪强³,周诗梦⁴,王娜⁵,曹佳⁶,尹俐¹(),刘文斌^3,⁶()

^1.重庆理工大学药学与生物工程学院药学系，重庆 400054
^2.重庆市巴南区疾病预防控制中心传染病防控与免疫规划科，重庆 401320
^3.陆军军医大学军事预防医学系军队环境卫生学教研室，重庆 400038
^4.陆军军医大学西南医院乳腺甲状腺外科，重庆 400038
^5.贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室，贵州贵阳 561113
^6.陆军军医大学军事预防医学系毒理学研究所，重庆 400038

收稿日期:2024-04-14 接受日期:2024-05-15 出版日期:2025-03-28 发布日期:2025-04-22
通讯作者: 尹俐,刘文斌 E-mail:yinli@cqut.edu.cn;liuwenbin@tmmu.edu.cn
作者简介:石雨（1998-），男，重庆市人，在读硕士研究生，主要从事环境内分泌干扰物对雄性生殖毒性方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金重点项目(82130097);国家重点研发计划项目(2022YFC2702902)

Bioinformatics analysis and experimental validation of BPS and BPF on signaling pathways of male reproductive system damage

Yu SHI¹,Jingzhi LI²,Hongqiang CHEN³,Shimeng ZHOU⁴,Na WANG⁵,Jia CAO⁶,Li YIN¹(),Wenbin LIU^3,⁶()

^1.Department of Pharmacy，College of Pharmacy and Bioengineering，Chongqing University of Technology，Chongqing 400054，China
^2.Department of Infectious Disease Prevention and Immunization Program，Center for Disease Control and Prevention，Banan District，Chongqing 401320，China
^3.Department of Environmental Health，College of Preventive Medicine，Army Medical University，Chongqing 400038，China
^4.Department of Breast and Thyroid Surgery，Southwest Hospital，Army Medical University，Chongqing 400038，China
^5.Key Laboratory of Environmental Pollution and Disease Monitoring and Control，Ministry of Education，School of Public Health，Guizhou Medical University，Guiyang 561113，China
^6.Institute of Toxicology，College of Preventive Medicine，Army Medical University，Chongqing 400038，China

Received:2024-04-14 Accepted:2024-05-15 Online:2025-03-28 Published:2025-04-22
Contact: Li YIN,Wenbin LIU E-mail:yinli@cqut.edu.cn;liuwenbin@tmmu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的通过生物信息学方法和实验验证，探讨新型双酚类污染物双酚S（BPS）和双酚F（BPF）诱导男性生殖系统损伤的信号通路。方法生物信息学分析，从比较毒理基因组学数据库（CTD）筛选出与BPF和BPS相关的男性生殖系统疾病基因，并通过基因本体论（GO）的功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，预测可能的信号通路及关键基因。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测不同浓度（1×10^-3、1×10^-2、1×10^-1、1×10⁰、1×10¹和1×10² μmol·L^-1）BPS和BPF作用下各组细胞活力；将TM3细胞分为对照组（0.1% DMSO）、不同剂量BPS和不同剂量BPF组，采用20、40和80 μmol·L^-1 BPS及BPF分别处理细胞72 h后，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blotting法检测各组细胞中关键基因mRNA及蛋白表达水平。结果生物信息学分析，通过CTD筛选出的分别与BPS及BPF相关的男性系统疾病基因数为507及447个。GO富集分析，筛选出的基因主要富集于生殖系统发育和生殖结构发育等生物过程（BP）。KEGG通路分析，这些基因主要富集于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）、缺氧诱导因子1（HIF-1）和细胞衰老等信号通路（P<0.001）中。实验验证，与对照组比较，1×10² μmol·L^-1 BPF和BPS组细胞活力明显降低（P<0.05），1×10^-3~1×10¹ μmol·L^-1 BPF和BPS组细胞活力无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。BPS处理后，与对照组比较，低、中和高剂量BPS组细胞中PI3K、AKT、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及CREB结合蛋白（CBP）mRNA表达水平降低（P<0.05），PI3K蛋白表达水平降低（P<0.05），B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平升高（P<0.05），丝氨酸蛋白酶肽酶抑制因子B支成员10（SERPINB10）mRNA表达水平升高（P<0.01）；中和高剂量BPS组细胞中Bax及细胞纤毛内转运同源蛋白80（IFT80）mRNA表达水平升高（P<0.05）；低和高剂量BPS组细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）；低和中剂量BPS组细胞中附加性梳基因2（ASXL2）mRNA表达水平降低（P<0.01）。BPF处理后，与对照组比较，低、中和高剂量BPF组细胞中Bcl-2、HIF-1α及染色体结构维持蛋白质1B（SMC1B）mRNA表达水平降低（P<0.05），IFT80 mRNA表达水平升高（P<0.01），Bax蛋白表达水平升高（P<0.01）；低和高剂量BPF组细胞中PI3K、AKT及环指蛋白130（RNF130）mRNA表达水平降低（P<0.05）；中剂量组BPF细胞中CBP mRNA表达水平降低（P<0.05），RNF130 mRNA表达水平升高（P<0.05）；高剂量BPF组细胞中PI3K和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 BPF和BPS可通过PI3K/AKT以及HIF-1信号通路产生生殖细胞毒性，损害男性生殖健康，RNF130和SMC1B可能是其诱导生殖毒性的重要靶点。

关键词: 双酚S, 双酚F, 比较毒理基因组学数据库, 男性生殖损伤, 睾丸间质细胞

Abstract:

Objective To investigate the pathways involved in bisphenol S （BPS） and bisphenol F （BPF） induced male reproductive injury by bioinformatics methods and experimental verification. Methods Bioinformatics analysis was conducted to screen the genes related to male reproductive system diseases associated with BPF and BPS from the Comparative Toxicogenomics Database （CTD）. Functional enrichment using Gene Ontology （GO） and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG） pathway enrichment analysis were performed to predict potential signaling pathways and key genes. Cell counting kit-8（CCK-8） method was used to assess the cell viability in various groups treated with different concentrations of BPS and BPF （1×10^-3， 1×10^-2， 1×10^-1， 1×10⁰，1×10¹， and 1×10² μmol·L^-1）. TM3 cells were divided into control group （0.1% DMSO）， different doses of BPS groups， and different doses of BPF groups. The cells were treated with 20， 40， and 80 μmol·L^-1 of BPS and BPF for 72 h， respectively. Real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） and Western blotting method were used to detect the expression levels of key genes mRNA and proteins in various groups. Results The bioinformatics analysis results revealed that 507 and 447 male systemic disease genes related to BPS and BPF were screened by CTD， respectively. The GO enrichment analysis results showed that the selected genes were primarily enriched in biological processes （BP） such as reproductive system development and reproductive structure development. The KEGG pathway analysis results indicated that these genes were significantly enriched in signaling pathways such as phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B （PI3K/AKT）， hypoxia-inducible factor-1（HIF-1）， and cellular senescence（P<0.001）. The CCK-8 method results showed that compared with control group， the cell viabilities in 1×10² μmol·L^-1 BPF and BPS groups were significantly decreased （P<0.05）， while the viabilities of TM3 cells in other groups had no significant changes （P>0.05）. After BPS treatment， compared with control group， the expression levels of PI3K， AKT， hypoxia-inducible factor-1α （HIF-1α）， and CREB-binding protein （CBP） mRNA in low， medium， and high doses of BPS groups were decreased （P<0.05）， the expression levels of PI3K protein were decreased （P<0.05）， the expression levels of B-cell lymphoma-2-associated X protein （Bax） protein were increased （P<0.05）， and the expression levels of serine protease inhibitor clade B， member 10 （SERPINB10） mRNA were increased （P<0.01）； the expression levels of Bax and intraflagellar transport 80 homolog （IFT80） mRNA in the cells in medium and high doses of BPS groups were increased （P<0.05）； the expression levels of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） mRNA and protein in low and high doses of BPS groups were decreased （P<0.05）； the expression levels of additional sex combs like 2 （ASXL2） mRNA in low and medium doses of BPS groups were decreased （P<0.01）. After BPF treatment， compared with control group， the expression levels of Bcl-2， HIF-1α， and structural maintenance of chromosomes protein 1B （SMC1B） mRNA in low， medium， and high doses of BPF groups were decreased （P<0.05）， and the expression levels of IFT80 mRNA （P<0.01） and Bax protein （P<0.01） were increased； the expression levels of PI3K， AKT， and ring finger protein 130 （RNF130） mRNA in low and high doses of BPF groups were decreased （P<0.05）； the expression level of CBP mRNA in medium dose of BPF group was decreased （P<0.05）， while the expression level of RNF130 mRNA was increased （P<0.05）； the expression levels of PI3K and Bcl-2 proteins in high dose of BPF group were decreased （P<0.05）. Conclusion BPF and BPS may cause cell cytotoxicity and impair male reproductive health through PI3K/AKT and HIF-1 signaling pathways. RNF130 and SMC1B may be important targets for their induction of male reproductive toxicity.

Key words: Bisphenol S, Bisphenol F, Comparative toxicogenomics database, Male reproduction damage, Leydig cells

中图分类号:

R114

石雨,李景芝,陈洪强,周诗梦,王娜,曹佳,尹俐,刘文斌. 双酚S和双酚F对雄性生殖系统损伤信号通路的生物信息学分析及其实验验证[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 460-470.

Yu SHI,Jingzhi LI,Hongqiang CHEN,Shimeng ZHOU,Na WANG,Jia CAO,Li YIN,Wenbin LIU. Bioinformatics analysis and experimental validation of BPS and BPF on signaling pathways of male reproductive system damage[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2025, 51(2): 460-470.

图/表 10

表1

图1

表2

表3

表4

表5

图2

表6

表7

表8

参考文献 28

1	HUANG Y Q， WONG C C， ZHENG J S， et al. Bisphenol A （BPA） in China： a review of sources， environmental levels， and potential human health impacts［J］. Environ Int， 2012， 42： 91-99.
2	ROCHESTER J R. Bisphenol A and human health： a review of the literature［J］. Reprod Toxicol， 2013， 42： 132-155.
3	XUE J C， KANNAN P， KUMOSANI T A， et al. Resin-based dental sealants as a source of human exposure to bisphenol analogues， bisphenol A diglycidyl ether， and its derivatives［J］. Environ Res， 2018， 162： 35-40.
4	ROSENMAI A K， DYBDAHL M， PEDERSEN M， et al. Are structural analogues to bisphenol a safe alternatives？［J］. Toxicol Sci， 2014， 139（1）： 35-47.
5	WU L H， ZHANG X M， WANG F， et al. Occurrence of bisphenol S in the environment and implications for human exposure： a short review［J］. Sci Total Environ， 2018， 615： 87-98.
6	YE X Y， WONG L Y， KRAMER J， et al. Urinary concentrations of bisphenol A and three other bisphenols in convenience samples of U.S. adults during 2000-2014［J］. Environ Sci Technol， 2015， 49（19）： 11834-11839.
7	ELADAK S， GRISIN T， MOISON D， et al. A new chapter in the bisphenol A story： bisphenol S and bisphenol F are not safe alternatives to this compound［J］. Fertil Steril， 2015， 103（1）： 11-21.
8	MOLANGIRI A， VARMA S， SATYAVANI M， et al. Prenatal exposure to bisphenol S and bisphenol A differentially affects male reproductive system in the adult offspring［J］. Food Chem Toxicol， 2022， 167： 113292.
9	MALAISÉ Y， LENCINA C， CARTIER C， et al. Perinatal oral exposure to low doses of bisphenol A， S or F impairs immune functions at intestinal and systemic levels in female offspring mice［J］. Environ Health， 2020， 19（1）： 93.
10	NGUYEN M， SABRY R， DAVIS O S， et al. Effects of BPA， BPS， and BPF on oxidative stress and antioxidant enzyme expression in bovine oocytes and spermatozoa［J］. Genes （Basel）， 2022， 13（1）： 142.
11	ALGONAIMAN R， ALMUTAIRI A S， ALZHRANI M M， et al. Effects of prenatal exposure to bisphenol A substitutes， bisphenol S and bisphenol F， on offspring’s health： evidence from epidemiological and experimental studies［J］. Biomolecules， 2023， 13（11）： 1616.
12	LAPP H E， MARGOLIS A E， CHAMPAGNE F A. Impact of a bisphenol A， F， and S mixture and maternal care on the brain transcriptome of rat dams and pups［J］. Neurotoxicology， 2022， 93： 22-36.
13	GONG P F， BAILBÉ D， TOLU S， et al. Preconceptional exposure of adult male rats to bisphenol S impairs insulin sensitivity and glucose tolerance in their male offspring［J］. Chemosphere， 2023， 314： 137691.
14	DAVIS A P， WIEGERS T C， JOHNSON R J， et al. Comparative toxicogenomics database （CTD）： update 2023［J］. Nucleic Acids Res， 2023， 51（D1）： D1257-D1262.
15	MÍNGUEZ-ALARCÓN L， HAUSER R， GASKINS A J. Effects of bisphenol A on male and couple reproductive health： a review［J］. Fertil Steril， 2016， 106（4）： 864-870.
16	SIRACUSA J S， YIN L， MEASEL E， et al. Effects of bisphenol A and its analogs on reproductive health： a mini review［J］. Reprod Toxicol， 2018， 79： 96-123.
17	QIU W H， SHAO H Y， LEI P H， et al. Immunotoxicity of bisphenol S and F are similar to that of bisphenol A during zebrafish early development［J］. Chemosphere， 2018， 194： 1-8.
18	SHI M X， WHORTON A E， SEKULOVSKI N， et al. Prenatal exposure to bisphenol A， E， and S induces transgenerational effects on male reproductive functions in mice［J］. Toxicol Sci， 2019， 172（2）： 303-315.
19	ULLAH A， PIRZADA M， JAHAN S， et al. Bisphenol A analogues bisphenol B， bisphenol F， and bisphenol S induce oxidative stress， disrupt daily sperm production， and damage DNA in rat spermatozoa： a comparative in vitro and in vivo study［J］. Toxicol Ind Health， 2019， 35（4）： 294-303.
20	TAN H L， ZHENG Z G， WANG S S， et al. Neonatal exposure to bisphenol analogues disrupts genital development in male mice［J］. Environ Pollut， 2023， 330： 121783.
21	ULLAH A， PIRZADA M， JAHAN S， et al. Bisphenol A and its analogs bisphenol B， bisphenol F， and bisphenol S： Comparative in vitro and in vivo studies on the sperms and testicular tissues of rats［J］. Chemosphere， 2018， 209： 508-516.
22	DENG C Y， LV M， LUO B H， et al. The role of the PI3K/AKT/mTOR signalling pathway in male reproduction［J］. Curr Mol Med， 2021， 21（7）： 539-548.
23	ZHAO W， LIU J R， WANG D F， et al. Effect of silencing HIF-1α gene on testicle spermatogenesis function in varicocele rats［J］. Cell Tissue Res， 2019， 378（3）： 543-554.
24	HE H S， LI X， SHEN J N， et al. Bisphenol A exposure causes testicular toxicity by targeting DPY30-mediated post-translational modification of PI3K/AKT signaling in mice［J］. Ecotoxicol Environ Saf， 2022， 243： 113996.
25	ZHOU J， QIAN C Y， TONG R Q， et al. Hypoxia induces apoptosis of mouse spermatocyte GC-2 cells through activation of autophagy［J］. Cell Biol Int， 2018， 42（9）： 1124-1131.
26	LI W H， TAN H， LIU J M， et al. Comparative analysis of testis transcriptomes associated with male infertility in triploid cyprinid fish［J］. Reprod Fertil Dev， 2019， 31（2）： 248-260.
27	FREEMONT P S， HANSON I M， TROWSDALE J. A novel cysteine-rich sequence motif［J］. Cell， 1991， 64（3）： 483-484.
28	GREITHER T， SCHUMACHER J， DEJUNG M， et al. Fertility relevance probability analysis shortlists genetic markers for male fertility impairment［J］. Cytogenet Genome Res， 2020， 160（9）： 506-522.

Transcript	Primer	Sequence (5′-3′)
PI3K	m-PI3K-F	CCATTACAAAGAAAGCCGGACTC
	m-PI3K-R	GGGGGCAGTGCTGGTG
AKT	m-AKT-F	GCCGCCTGATCAAGTTCTCC
	m-AKT-R	TTCAGATGATCCATGCGGGG
Bcl-2	m-Bcl-2-F	GACTGAGTACCTGAACCGGC
	m-Bcl-2-R	AGTTCCACAAAGGCATCCCAG
HIF-1α	m-HIF-1α-F	CGCCTCTGGACTTGTCTCTT
	m-HIF-1α-R	CGACGTTCAGAACTCATCCTATTTT
CBP	m-CBP-F	GGAAAGCCTGCCAAGTTGC
	m-CBP-R	ACAGTCATGTCGTGTGCAGT
Bax	m-Bax-F	CTGGATCCAAGACCAGGGTG
	m-Bax-R	GTGAGGACTCCAGCCACAAA
RNF130	m-RNF130-F	CCTTGCCGGTGACAGTTCC
	m-RNF130-R	CCTTCTTCAAAACCATTCTACCTTG
SERPINB10	m-SERPINB10-F	GTCCGACTTCCAGACCCTTG
	m-SERPINB10-R	TTGTGGTTCTGCCCCAAAGT
ASXL2	m-ASXL2-F	CGACTTCCCCTTTCTCCCAC
	m-ASXL2-R	GTTCTGACTGACTGGGAGGC
SMC1B	m-SMC1B-F	AGCTACAACTGTGTGGCTCC
	m-SMC1B-R	AAGAATGGAGCAGGCCGAAA
IFT80	m-IFT80-F	TCCTGGAACTTGAGTGAATACAA
	m-IFT80-R	ACTTGACGATCTGGTGGTCG
β-actin	m-β-actin-F	ACTATTGGCAACGAGCGGTT
	m-β-actin-R	GCCACAGGATTCCATACCCAA

Group	Cell viability
Group	（t/h）24	48	72
Control	1.00±0.06	1.00±0.05	1.00±0.02
BPF [c_B/μmol·L^-1]
1×10^-3	0.99±0.05	0.97±0.08	0.98±0.02
1×10^-2	1.05±0.03	0.87±0.04	0.92±0.01
1×10^-1	0.92±0.06	0.88±0.03	0.90±0.01
1×10⁰	0.99±0.03	0.90±0.03	0.87±0.02
1×10¹	0.86±0.03	0.83±0.04	0.84±0.01
1×10²	0.88±0.07^*	0.33±0.01^**	0.18±0.02^**

Group	Cell viability
Group	(t/h) 24	48	72
Control	1.00±0.05	1.00±0.02	1.00±0.02
BPS [c_B/μmol·L^-1]
1×10^-3	0.94±0.05	0.96±0.05	0.97±0.02
1×10^-2	0.89±0.09	0.99±0.03	0.91±0.02
1×10^-1	0.81±0.04	0.94±0.05	0.91±0.03
1×10⁰	0.83±0.07	0.92±0.04	0.91±0.02
1×10¹	0.83±0.03	0.90±0.03	0.92±0.02
1×10²	0.84±0.05^**	0.71±0.02^**	0.70±0.04^**

Group	PI3K	AKT	Bcl-2	HIF-1α	CBP	Bax
Control	1.00±0.01	1.00±0.04	1.00±0.01	1.00±0.02	1.00±0.05	1.00±0.01
BPS
Low dose	0.77±0.09^*	0.47±0.02^**	0.90±0.02^*	0.26±0.03^**	0.71±0.02^*	0.69±0.02^*
Medium dose	0.47±0.01^*	0.35±0.04^**	0.95±0.02	0.46±0.02^**	0.75±0.03^**	1.41±0.04^**
High dose	0.87±0.04^*	0.34±0.03^**	0.80±0.01^**	0.46±0.02^**	0.68±0.03^**	1.16±0.04^**

Group	PI3K	AKT	Bcl-2	HIF-1α	CBP	Bax
Control	1.00±0.09	1.00±0.04	1.00±0.01	1.00±0.02	1.00±0.05	1.00±0.01
BPF
Low dose	0.76±0.01^**	0.81±0.03^*	0.51±0.01^*	0.64±0.04^**	0.94±0.01	1.08±0.03
Medium dose	0.91±0.02	0.89±0.07	0.49±0.01^**	0.55±0.03^**	0.88±0.01^*	1.02±0.04
High dose	0.81±0.06^*	0.84±0.01^*	0.60±0.00^**	0.75±0.05^**	0.92±0.01	1.11±0.04

双酚S和双酚F对雄性生殖系统损伤信号通路的生物信息学分析及其实验验证

Bioinformatics analysis and experimental validation of BPS and BPF on signaling pathways of male reproductive system damage

RichHTML

PDF (PC)

赞

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表 10

参考文献 28

相关文章 3

Metrics

本文评价

推荐阅读 0

Group	PI3K	Bcl-2	Bax
BPS
Control	1.00±0.01	1.00±0.03	1.00±0.13
Low dose	0.83±0.01^*	0.81±0.08^*	2.37±0.01^*
Medium dose	0.76±0.11^**	0.95±0.04	2.72±0.39^*
High dose	0.51±0.09^***	0.79±0.04^*	3.25±0.58^**
BPF
Control	1.00±0.02	1.00±0.02	1.00±0.02
Low dose	0.85±0.14	0.95±0.03	1.50±0.02^△△
Medium dose	0.94±0.13	0.92±0.03	1.45±0.01^△△
High dose	0.57±0.14^△	0.53±0.03^△△	1.83±0.01^△△

Group	RNF130	SERPINB10	ASXL2	SMC1B	IFT80
Control	1.00±0.25	1.00±0.06	1.00±0.03	1.00±0.02	1.00±0.02
BPS
Low dose	1.11±0.13	1.51±0.03^**	0.73±0.02^**	0.78±0.09	1.01±0.03
Medium dose	1.13±0.19	1.67±0.05^**	0.87±0.03^**	1.01±0.05	1.25±0.06^**
High dose	1.52±0.21	2.08±0.17^**	0.96±0.04	1.27±0.12	1.17±0.06^*

Group	RNF130	SERPINB10	ASXL2	SMC1B	IFT80
Control	1.00±0.17	1.00±0.01	1.00±0.04	1.00±0.12	1.00±0.02
BPF
Low dose	0.20±0.10^**	0.83±0.02^*	0.77±0.08^*	0.45±0.01^**	1.46±0.04^**
Medium dose	1.18±0.01^*	1.08±0.08	0.78±0.03^*	0.40±0.01^*	1.49±0.07^**
High dose	0.15±0.06^**	0.94±0.21	0.79±0.07	0.60±0.02^**	1.53±0.04^**

[1]	刘玥欣,来永巍,王艳春,徐博,路倩,安英,任旷,范红艳. 苦参总黄酮对醋酸铅诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激的改善作用及对Keap1/Nrf2信号通路的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(2): 320-325.
[2]	孙士莹,孙戈,林琳,赵越. 雄激素受体辅调节因子BAP18在大鼠睾丸细胞中的表达及其意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 584-590.
[3]	赵丽晶，路明，韩雪，张睿，李若文，赵雪俭，杨宝学，郭丽荣. UT-B基因敲除小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌水平变化及其对性成熟的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 448-452.