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吉林大学学报(医学版) 2018, 44(04) 718-723 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180405 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R |
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| 基础研究 |
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| 线粒体靶向KillerRed诱导的ROS增强辐射对HeLa细胞的增殖抑制作用 |
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李鑫, 马云飞, 唐庚, 韦麒, 纪红池, 田嘉安, 申延男, 王志成 |
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吉林大学公共卫生学院 国家卫生健康委员会放射生物学重点实验室, 吉林 长春 130021 |
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摘要：目的：构建线粒体靶向KillerRed （KR）重组表达载体，探讨可见光照射诱导活性氧（ROS）生成规律及其增强电离辐射对HeLa细胞的增殖抑制作用。方法：利用基因重组技术构建线粒体靶向重组载体plxsp-flag-Sarm1-KR和plxsp-flag-Sarm1-mCherry。将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、plxsp-flag组、plxsp-flag-Sarm1-KR组、4 Gy组、plxsp-flag+4 Gy组和plxsp-flag-Sarm1-KR+4 Gy组。细胞转染24 h后，利用荧光显微镜检测mCherry蛋白和细胞色素C氧化酶Ⅳ（COXⅣ）蛋白表达水平；可见光照射后利用DCFH-DA探针检测平均荧光强度（MFI），表示ROS生成水平；4 Gy X射线照射后，利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性。结果：构建载体经测序鉴定并与GenBank序列比对，表明线粒体靶向融合表达载体plxsp-flag-Sarm1-KR （mCherry）构建成功。转染HeLa细胞后，荧光显微镜下可见mCherry蛋白与线粒体示踪COXⅣ蛋白具有相同的定位。ROS生成水平，对照组和plxsp-flag组在可见光照射10、30和60 min后掺入探针，掺入探针10、30和60 min后MFI无明显变化（P>0.05）； plxsp-flag-Sarm1-KR组MFI呈时间依赖性增加，与对照组比较，plxsp-flag-Sarm1-KR组可见光照射10和30 min后掺入探针，掺入探针60 min后MFI明显增加（P<0.05）；可见光照射60 min后掺入探针，掺入探针30和60 min后plxsp-flag-Sarm1-KR组MFI明显降低（P<0.05）。与对照组比较，plxsp-flag组细胞增殖活性无明显变化（P>0.05），10和24 h时plxsp-flag-Sarm1-KR组细胞增殖活性明显降低（P<0.05），10 h时4 Gy组和plxsp-flag+4 Gy组细胞增殖活性明显降低（P<0.01），10、24和48 h时plxsp-flag-Sarm1-KR+4 Gy组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）；与plxsp-flag-Sarm1-KR组和4 Gy组比较，plxsp-flag-Sarm1-KR+4 Gy组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。结论：成功构建线粒体靶向融合表达载体，所介导的KR蛋白可以诱导ROS产生，并且增强电离辐射对HeLa细胞的增殖抑制作用。 |
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关键词：
细胞增殖
活性氧
KillerRed
线粒体
电离辐射
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收稿日期
2017-12-04
修回日期
网络版发布日期
2018-07-27
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DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180405 |
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基金项目: 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20180101305JC）；吉林省教育厅科学技术项目资助课题（JJKH20170828KJ，JJKH20180189KJ）；吉林省卫计委科研项目资助课题（20165069） |
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通讯作者: 申延男,副教授,硕士研究生导师(Tel:0431-84995443,E-mail:204197896@qq.com);王志成,副教授,硕士研究生导师(Tel:0431-85619443,E-mail:zhicheng@jlu.edu.cn) |
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作者简介: 李鑫(1993-),女,吉林省通化市人,在读医学硕士,主要从事辐射肿瘤学方面的研究。 |
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