2. 吉林大学中日联谊医院神经外科, 吉林 长春 130033;
3. 吉林医药学院抗体中心, 吉林 吉林 132013
| 吉林大学学报(医学版) 2019, 45(06) 1193-1198 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190601 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R | ||
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| 基础研究 | ||
| AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达 | ||
| 许会静1, 刘晴1, 闫冰1, 刘微1, 张磊1, 郭健1, 姜琳1, 李淼2, 孙美艳1, 李艳1,3 | ||
| 1. 吉林医药学院检验学院实验中心, 吉林 吉林 132013; 2. 吉林大学中日联谊医院神经外科, 吉林 长春 130033; 3. 吉林医药学院抗体中心, 吉林 吉林 132013 |
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| 摘要：目的：构建水通道蛋白4（AQP4）真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23，检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法：采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因，经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接，构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中，将细胞随机分为对照组（未转染重组质粒的V79细胞）和转染组（转染重组质粒的V79细胞）。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达；取视神经脊髓炎（NMO）患者血清中抗AQP4抗体，与2组细胞结合，采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果：成功构建AQP4真核表达载体；荧光显微镜观察，转染组细胞膜清晰表达红色荧光；免疫荧光检测，转染组细胞膜呈现绿色荧光，表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合；与对照组比较，转染组细胞中hAQP4-M23活性升高（P<0.05）。结论：成功构建表达AQP4基因的真核表达载体，并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。 | ||
| 关键词： | ||
| 收稿日期 2019-03-06 修回日期 网络版发布日期 2019-12-05 | ||
| DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190601 | ||
| 基金项目: | ||
| 通讯作者: 孙美艳,副教授(Tel:0432-64560169,E-mail:sunmy990@163.com);李艳,教授,硕士研究生导师(Tel:0432-64560321,E-mail:289876858@qq.com) | ||
| 作者简介: | ||
| Copyright © 2008 by 吉林大学学报(医学版) | ||