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吉林大学学报(医学版) 2020, 46(03) 458-463 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20200305 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R |
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| 基础研究 |
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| 类弹性蛋白展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的制备和纯化 |
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付鑫, 龚福梅, 丁宁, 朱静, 杨春光, 胡学军 |
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大连大学医学研究中心, 辽宁 大连 116622 |
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摘要：目的：利用大肠杆菌（E.coli）高效制备类弹性蛋白（ELP）展示N端脑钠肽前体（NT-proBNP）双抗原表位的重组蛋白，为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据。方法：分别设计NT-proBNP第13~20位和第63~71位氨基酸残基表位，通过柔链连接上述2个抗原表位与ELP融合，获得3种融合蛋白。利用基因工程技术合成编码以上3种融合蛋白的基因并克隆到pET-28a （+）载体上，转入E.coli BL21（DE3）自动诱导表达，利用多次可逆相变循环（ITC）纯化重组蛋白，并应用Western blotting和ELISA法检测其抗体特异结合表位的能力。结果：成功构建了3种ELP展示NT-proBNP抗原表位的载体，并在E.coli中表达获得相应重组蛋白。Western blotting和直接ELISA检测，ELP展示的特异抗原表位均具有良好的与相应抗体结合的能力。夹心ELISA法检测，ELP展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的蛋白浓度与450 nm处吸光度（A）值呈双对数线性剂量依赖关系（r=0.9197，P<0.01）。结论：成功利用ELP展示NF-proBNP双抗原表位，为低成本、高效地制备出与NT-proBNP检测校准品奠定了基础。 |
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关键词：
N-端脑钠肽前体
类弹性蛋白
抗原表位
大肠杆菌
心力衰竭
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收稿日期
2019-07-19
修回日期
网络版发布日期
2020-06-11
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DOI: 10.13481/j.1671-587x.20200305 |
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基金项目: 国家自然科学基金面上项目资助课题（31370937） |
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通讯作者: 胡学军,教授,博士研究生导师(Tel:0411-87403961,E-mail:xuejun.hu3@foxmail.com);杨春光,讲师(Tel:0411-87403961,E-mail:yangchunguang@dlu.edu.cn) |
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作者简介: 付鑫(1994-),女,辽宁省沈阳市人,在读医学硕士,主要从事蛋白质工程方面的研究。 |
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