吉林大学学报(医学版) 2021, 47(2) 511-518 DOI: 10.13481/j.1671-587X.20210234    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R

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方法学
水通道蛋白4小分子抑制剂的筛选和验证
王楠1,郭健2,闫冰2,刘晴2,张磊2,3,许会静2,李淼4,孙美艳2()
1.吉林医药学院基础医学院实验中心,吉林 吉林 132013
2.吉林医药学院检验学院实验中心,吉林 吉林 132013
3.吉林省抗体工程科技协同创新中心,吉林 吉林 132013
4.吉林大学中日联谊医院神经外科,吉林 长春 130033
摘要目的

采用高通量筛选方法筛选出抑制视神经脊髓炎(NMO)-IgG与水通道蛋白4(AQP4)结合的小分子。

方法

将FRT-AQP4细胞分为阴性对照组(不加小分子化合物)和筛选组,采用化学发光法检测辣根过氧化物酶(HRP)活性。将V79-AQP4细胞分为抑制剂组(neosutchuenenine)和二甲基亚砜(DMSO)组,采用免疫荧光法检测各组细胞荧光强度,荧光猝灭法检测各组细胞的水通透性,CellTiter-Glo? 发光法检测补体依赖的细胞毒性,水溶性四氮唑1(WST-1)法检测细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞凋亡情况。

结果

与阴性对照组比较,筛选组HRP活性明显升高(P<0.01)。与DMSO组比较,抑制剂组红色荧光强度明显降低,而绿色荧光无明显变化;与DMSO组比较,抑制剂组水通透性无明显变化(P>0.05),补体依赖的细胞毒性明显降低(P<0.01),细胞活性和细胞凋亡无明显变化(P>0.05)。

结论

成功建立高通量筛选AQP4小分子抑制剂的方法,并筛选出具有阻断作用的小分子抑制剂neosutchuenenine。

关键词: 水通道蛋白 视神经脊髓炎 小分子抑制剂 高通量筛选
收稿日期  2020-07-02   修回日期    网络版发布日期  2021-03-25  
DOI: 10.13481/j.1671-587X.20210234
基金项目: 国家自然科学基金项目(81771304);吉林省科技厅科技计划发展项目(20200201623JC);吉林省中医药管理局科研项目(2019140);吉林省卫健委卫生科研人才专项项目(2018ZC032);吉林省卫健委卫生科技创新项目(20192C005);吉林省吉林市科技局科技创新发展计划项目(20190104127)
通讯作者: 孙美艳
作者简介: 王 楠(1988-),男,吉林省吉林市人,实验员,理学硕士,主要从事天然活性成分及其机制方面的研究。

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