重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

doi:国家自然科学基金资助课题（30600160，3057

重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

杨巍¹，孙婷²，龚平生³，李修义¹，龚守良¹

1. 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春 130021; 2. 吉林大学基础医学院生物化学教研室，吉林长春 130021;3. 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室，吉林长春 130021

收稿日期:2006-09-04 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-09-28 发布日期:2007-09-28
通讯作者: 龚守良

Construction of recombinant plasmid pIRESEgr-IFNγ and its expression in Lewis lung carcinoma induced by irradiation

YANG Wei¹, SUN Ting², GONG Ping-sheng³, LI Xiu-yi¹, GONG Shou-liang¹

1.Key Laboratory of Radiobiology, Ministry of Health,School of Public Health,Jilin University, Changchun 130021, China; 2. Department of Biochemistry, School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, China; 3. Key Laboratory for Molecular Enzymology and Engineering, Ministry of Education, Jilin University, Changchun 130021, China

Received:2006-09-04 Revised:1900-01-01 Online:2007-09-28 Published:2007-09-28
Contact: GONG Shou-liang

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建重组真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ并检测其在体外培养的Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法：利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ表达质粒，脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞，酶联免疫吸附法（ELISA）检测0、2、5和10 Gy X射线诱导IFNγ表达的量效和时程关系。结果：酶切鉴定证实，Egr-1启动子和IFNγ基因正确插入真核表达载体pIRES1neo；2、5和10 Gy X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞，上清中IFNγ表达量明显高于假照组（P＜0.001），其中5 Gy照射后表达量最高，为假照组的4.39倍。5 Gy照射后2、6、12和36 h上清中IFNγ表达量逐渐增加（P＜0.001），照射后36 h表达量为照射前的6.27倍。结论：成功构建了真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ，该质粒具有辐射诱导基因表达增强特性。

关键词: 干扰素Ⅱ型, 癌, Lewis肺, 治疗, X射线

Abstract: Abstract:Objective To construct the recombinant plasmid pIRESEgr-IFNγ and detect its expression in Lewis lung carcinoma induced by irradiation in vitro. Methods The recombinant plasmid pIRESEgr-IFNγ containing Egr-1 promoter and IFNγ gene was constructed with gene recombinant technique. The plasmid was transferred into Lewis lung carcinoma by liposome in vitro. The correlations of dose- and time-effects in the expression of IFNγ gene induced by X-ray were detected by ELISA. Results The identification with enzymes proved that Egr-1 promoter and IFNγ gene were inserted into vector pIRES1neo correctly. After X-ray irradiation with different doses, the expression of IFNγ in the supernatant of Lewis lung carcinoma transfected by pIRESEgr-IFNγ was significantly higher than that in 0 Gy group (Ｐ＜0.001). After 5 Gy X-ray irradiation, the expression of IFNγ was the highest, being 4.39 times as much as that in 0 Gy group. The expression of IFNγ in the supernatant increased after 5 Gy X-ray irradiation, being 6.27 times as much as that in 0 h group 36 h after irradiation. Conclusion The recombinant plasmid pIRESEgr-IFNγ is constructed successfully, and it has the property of enhancing the expression of IFNγ gene induced by irradiation.

Key words: interferon typeⅡ, carcinoma, Lewis lung, therapy, X-rays

中图分类号:

Q691.5

杨巍，孙婷，龚平生，李修义，龚守良. 重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达[J]. J4, 2007, 33(5): 790-793.

YANG Wei, SUN Ting, GONG Ping-sheng, LI Xiu-yi, GONG Shou-liang. Construction of recombinant plasmid pIRESEgr-IFNγ and its expression in Lewis lung carcinoma induced by irradiation[J]. J4, 2007, 33(5): 790-793.

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