具有GPX活性单链抗体的制备及其抗氧化效应

具有GPX活性单链抗体的制备及其抗氧化效应

李维佳，魏景艳，孙晔，牟颖，吕绍武，闫岗林，罗贵民

吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室，长春 130023

收稿日期:2004-01-09 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-07-26 发布日期:2004-07-26
通讯作者: 牟颖

Generation of single-chain antibody with GPX activity and its antioxidant effect

LI Wei-jia, WEI Jing-yan, SUN Ye, MU Ying, Lv Shao-wu, YAN Gang-lin, LUO Gui-min

Key Laboratory of Molecular Enzymology and Engineering of the Ministry of Education, Jilin University, Changchun 130023, China

Received:2004-01-09 Revised:1900-01-01 Online:2004-07-26 Published:2004-07-26
Contact: MU Ying

摘要/Abstract

摘要： 为实现单链抗体的可溶性表达，制备具有谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活力的单链抗体，在单链抗体表达载体pTMF-2F3上去除原2F3基因N端非必需的18个氨基酸，采用新的表达载体pRose质粒，在2F3的N端引入13个氨基酸的前导肽，转入BL21（lys S）中，使其分泌到大肠杆菌的周质腔中得以表达，获得可溶性表达产物. 产物经过分离纯化、 Wester n Blot印迹和硒化测活确定具有GPX活性的鼠单链抗体，其GPX活力为2 530 U/μmol. 以脂质过氧化、细胞存活率和细胞膜完整性为指标的抗氧化实验研究表明，具有GPX活性的单链抗体对大鼠乳鼠表皮细胞有抗紫外线损伤的作用，是膜脂质过氧化的有效抑制剂.

关键词: 谷胱甘肽过氧化物酶, 单链抗体, 可溶性表达, 抗氧化

Abstract: To get soluble form of single-chain Fv of antibody (scFv) and generate selenium-containing scFv with glutathione peroxidase (GPX) activity, scFv expression vector pTMF-2F3 was replaced by a new vector pRose-2F3. Non-essential amino acids of 18 were removed from pTMF-2F3 and a signal peptide was introduced in t he pRose at the N end of 2F3. The 2F3 antibody was expressed as a soluble prote in in the periplasm cavity of E. coli BL21 (lys S). The purified product was con firmed by Western Blotting. Se-2F3-ScFv is generated by the chemical mutatio n of 2F3-ScFv. The GPX activity of Se-2F3-ScFv is 2　530 U/μmol. For studying its protection of epidermal cell from UVB damage, the effects of UVB and Se-2F3- ScFv on lipid peroxidation, the cell viability and cell membrane integrity were investigat ed. It was found that Se-2F3-ScFv possessed strong ability to prevent epidermal cells from UVB damage and was an effective membrane peroxidation inhibitor.

Key words: glutathione peroxidase, single-chain variable fragment of antibody, soluble expression, antioxidation

中图分类号:

Q511

李维佳，魏景艳，孙晔，牟颖，吕绍武，闫岗林，罗贵民. 具有GPX活性单链抗体的制备及其抗氧化效应[J]. J4, 2004, 42(03): 458-462.

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