双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

吉林大学学报(理学版)

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

张耀方1,2, 马百成1, 屠培培1, 李宠1, 马志华1, 姬艳丽1, 董震1,马超1, 郝军凤1, 李晓丹1, 王宇1, 李明刚1

1. 南开大学生命科学学院, 分子生物学研究所, 生物活性材料教育部重点实验室, 天津 300071;2. 天津农学院, 天津 300384

收稿日期:2013-02-23 出版日期:2014-01-26 发布日期:2014-03-05
通讯作者: 李明刚 E-mail:mgl@nankai.edu.cn

onstruction and Function Analysis ofDualfunctional Peptide (5rolGLP-HV)

ZHANG Yaofang^1,2, MA Baicheng¹, TU Peipei¹, LI Chong¹, MA Zhihua¹, JI Yanli¹,DONG Zhen¹, MA Chao¹, HAO Junfeng¹, LI Xiaodan¹, WANG Yu¹, LI Minggang¹

1. College of Life Science, Institute for Molecular Biology, The Key Laboratory for Bioactivematreialof Ministry of Education, Nankai University, Tianjin 300071, China;2. Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China

Received:2013-02-23 Online:2014-01-26 Published:2014-03-05
Contact: LI Minggang E-mail:mgl@nankai.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽（rolGLP-1）和水蛭素（rHV）融合基因促胰岛素水蛭素（5rolGLP-HV）, 并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 实现了高效表达. 表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA]亲和层析柱纯化, 得到高纯度的5rolGLP-HV. 用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析, 结果表明, 5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.

关键词: 糖尿病, 血栓, 促胰岛素水蛭素, 表达, 纯化, 功能分析

Abstract:

We constructed a fusion gene consisted of five copies longacting Glucagonlike peptide1 (rolGLP-1) and Hirudin (rHV) called 5rolGLP-HV by molecular cloning. 5rolGLP=HV gene was cloned into the expression vector pET22b (+) and translated into BL21 (DE3), and a highly expression bacterial strain was obtained. The expression product 5rolGLPHV was analyzed by SDS-PAGE electrophoresis and Western bolt, and was purified with NiNTA. Function analysis was performed via STZinduced type Ⅱ diabetic mice and thrombosis mice. The results show 5rolGLPHV has reducing blood glucose and antithrombotic effects.

Key words: diabetes mellitus, thrombosis, 5rolGLPHV; expression, purification, function analysis

中图分类号:

Q189

张耀方, 马百成, 屠培培, 李宠, 马志华, 姬艳丽, 董震,马超, 郝军凤, 李晓丹, 王宇, 李明刚. 双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析[J]. 吉林大学学报(理学版), 2014, 52(01): 131-136.

ZHANG Yaofang, MA Baicheng, TU Peipei, LI Chong, MA Zhihua, JI Yanli,DONG Zhen, MA Chao, HAO Junfeng, LI Xiaodan, WANG Yu, LI Minggang. onstruction and Function Analysis ofDualfunctional Peptide (5rolGLP-HV)[J]. Journal of Jilin University Science Edition, 2014, 52(01): 131-136.

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