EHD2、miR-let-7c和lncRNA FOXD2-AS1在人喉鳞状细胞癌组织中的表达及其关联性分析

doi:10.13481/j.1671-587X.20240521

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨Eps15同源结构域蛋白2（EHD2）、微小RNA let-7c（miR-let-7c）和长链非编码RNA（lncRNA） FOXD2-AS1在喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中的表达水平，阐明EHD2/miR-let-7c/FOXD2-AS1信号轴与LSCC发生的关联性。方法收集40例LSCC患者的癌组织标本，按照病理类型分为低级别组（中或高分化，32例）和高级别组（低分化，8例），按照肿瘤淋巴结转移（TNM）临床分期分为TNM早期组（Ⅰ-Ⅱ期，13例）和TNM晚期组（Ⅲ-Ⅳ期，27例），按照有无淋巴结转移分为转移组（21例）和无转移组（19例）。另取40例对应癌旁正常组织标本作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组标本中EHD2表达情况，分析其与LSCC患者临床病理参数之间的关系，采用生物信息学方法筛选出miR-let-7c作为候选微小RNA（miRNA），与其启动子区域存在结合位点的FOXD2-AS1作为候选lncRNA。取10对新鲜的LSCC组织标本和癌旁正常组织标本，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组样本中EHD2 mRNA、miRNA-let-7c和FOXD2-AS1表达水平，并验证其关联性。结果与癌旁正常组织比较，LSCC组织中EHD2表达水平明显降低（P<0.01），且TNM早期组患者LSCC组织中EHD2阳性表达率明显高于TNM晚期组（P<0.05），病理类别和有无淋巴结转移与EHD2表达无明显关联（P>0.05）。与癌旁正常组织比较，LSCC组织中miR-let-7c表达水平明显降低（P<0.01），FOXD2-AS1表达水平明显升高（P<0.05）。LSCC组织中FOXD2-AS1与miR-let-7c表达水平呈负相关关系（r=-0.67，P<0.05），miR-let-7c与EHD2 mRNA表达水平呈负相关关系（r=-0.83，P<0.01）。结论 EHD2和miR-let-7c在LSCC组织中呈低表达，可能是新的抑癌基因；FOXD2-AS1在LSCC组织中高表达，可能是新的原癌基因；FOXD2-AS1/miR-let-7c/EHD2信号轴可能参与了LSCC的发生发展。

关键词: Eps15同源结构域蛋白2, 微小RNA let-7c, 喉鳞状细胞癌, 长链非编码核糖核酸, 原癌基因

Abstract:

Objective To discuss the expression levels of Eps15 homology domain-containing protein 2 （EHD2）， microRNA let-7c （miR-let-7c）， and long non-coding RNA （lncRNA） FOXD2-AS1 in laryngeal squamous cell carcinoma （LSCC） tissue， and to clarify the association between EHD2/miR-let-7c/FOXD2-AS1 signaling axis and occurrence of LSCC. Methods Forty LSCC tissue samples were collected and classified into low grade group （moderately or high differentiated， 32 cases） and high grade group （poorly differentiated， 8 cases） according to the pathology results； according to the tumor node metastasis（TNM） clinical staging results， the samples were divided into TNM early stage group （stages Ⅰ-Ⅱ， 13 cases） and TNM late stage group （stages Ⅲ-Ⅳ， 27 cases）； based on the lymph node metastasis results， the samples were divided into metastasis group （21 cases） and non-metastasis group （19 cases）. Additionally， 40 corresponding normal adjacent tissue samples were collected as control group. Immunohistochemistry method was used to detect the expressions of EHD2 in various groups and its relationships with clinical pathoparameters of the LSCC patients were analyzed； bioinformatics method was used to confirm that the miR-let-7c was the candidate microRNA（miRNA） and FOXD2-AS1， which had binding sites in its promoter region， was a candidate lncRNA. Ten pairs of fresh LSCC tissue samples and adjacent normal tissue samples were collected. Real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method was used to detect the expression levels of EHD2 mRNA， miR-let-7c， and FOXD2-AS1 in the samples in two groups， and their associations were verified. Results Compared with adjacent normal tissue， the expression level of EHD2 in LSCC tissue was significantly decreased （P<0.01）. The positive expression rate of EHD2 in LSCC tissue of the patients in TNM early stage group was significantly higher than that in TNM late stage group （P<0.05）. There was no significant association between EHD2 expression and pathological type or lymph node metastasis （P>0.05）. Compared with control group， the expression level of miR-let-7c in LSCC tissue was significantly decreased （P<0.05）， while the expression level of FOXD2-AS1 was significantly increased （P<0.05）. In LSCC tissue， the expression level of FOXD2-AS1 was negatively correlated with the expression level of miR-let-7c （r=-0.67，P<0.05）， and the expression level of miR-let-7c was negatively correlated with the expression level of EHD2 mRNA（r=-0.83， P<0.01）. Conclusion EHD2 and miR-let-7c both express at low levels in LSCC tissue and may be new tumor suppressor genes； FOXD2-AS1 is highly expressed in LSCC tissue and may be a new oncogene. FOXD2-AS1/miR-let-7c/EHD2 signaling axis may be involved in the occurrence and development of LSCC.

Key words: Eps15 homologous domain protein 2, MicroRNA-let-7c, Laryngeal squamous cell carcinoma, Long-chain non-coding RNA, Proto-oncogene

中图分类号:

R767.19

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Group	EHD2（+）	EHD2（-）	χ²	P
LSCC tissue	12（30.0）	28（70.0）	10.1	<0.01
Adjacent normal tissue	27（67.5）	13（32.5）	10.1	<0.01

Clinicopathological parameter	n	Number of EHD2 expression		Positive rate （η/%）	P
Clinicopathological parameter	n	Positive	Negative	Positive rate （η/%）	P
Pathological grade
Low grade	32	10	22	31	0.730 1
High grade	8	2	6	25	0.730 1
TNM stage
Ⅰ-Ⅱ	13	7	6	54	0.032 3
Ⅲ-Ⅳ	27	5	22	19	0.032 3
Lymph node metastasis
Yes	21	5	16	24	0.494 5
No	19	7	12	37	0.494 5

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