J4 ›› 2010, Vol. 36 ›› Issue (2): 258-261.
人NOB1基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定
林杨, 崔满华, 滕红, 许天敏
- 吉林大学第二医院妇产科|吉林 长春 130041
Construction of shRNA lentiviral vector targeting human NOB1 gene and identification of RNAi efficiency
LIN Yang, CUI Man-Hua, TENG Hong, XU Tian-Min
- Department of Obstetrics and Gynecology,Second Hospital,Jilin University,Changchun 130021,China
摘要：
目的：构建人NOB1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并在卵巢癌SKOV3和HEY细胞上定其沉默效率。 方法：针对NOB1基因设计特异性siRNA靶点，构建于慢病毒pLVTHM载体，筛选获得的有效shRNA慢病毒载体在293T细胞包装成病毒颗粒，随后将其感染卵巢癌SKOV3和HEY细胞，采用Real-time PCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。 结果：构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确，包装病毒后滴度达到8×108 PU/L。shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3和HEY细胞后NOB1基因的 mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了73.5%和82.2%。 结论：成功构建NOB1基因的shRNA慢病毒表达载体，该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
中图分类号:
- Q78