重组人β-淀粉样蛋白1-42大规模发酵及纯化工艺

doi:国家高技术研究发展计划（863计划）资助课

重组人β-淀粉样蛋白1-42大规模发酵及纯化工艺

申茉函¹，王全才²,刘佳伟³,韦安慧¹，朱洁¹，颜炜群¹

1.吉林大学药学院医学生物工程研究室，吉林长春 130021；2.中国医科大学盛京医院神经外科,辽宁沈阳 110003；3.吉林省长春市第六医院ECT醒脉通治疗室，吉林长春 130052

收稿日期:2008-05-12 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-01-28 发布日期:2009-01-28
通讯作者: 颜炜群

Large scale fermentation and purification technologyof recombinant human β-amyloid peptide 1-42

SHEN Mo-han¹,WANG Quan-cai²,LIU Jia-wei¹,WEI An-hui¹,ZHU Jie¹,YAN Wei-qun¹

1.Department of Bioengineering,School of Pharmacy,Jilin University,Changchun 130021,China; 2. Department of Neurosurgery,Shengjing Hospital,China Medical University，Shenyang 110003,China; 3. Department of ECT,Sixth Hospital of Changchun City,Changchun 130052,China

Received:2008-05-12 Revised:1900-01-01 Online:2009-01-28 Published:2009-01-28
Contact: YAN Wei-qun

摘要/Abstract

摘要： 目的:在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达人β-淀粉样蛋白1-42(hAβ_1-42)，用80 L的发酵罐大量制备hAβ_1-42。方法: 在成功构建表达载体pPICZα-hAβ_1-42并电转化至毕赤酵母X-33的基础上，筛选高表达hAβ_1-42工程菌，对发酵液的pH值、溶解氧、甲醇流加速度以及诱导表达的时间等发酵条件进行系统优化，通过阳离子交换层析和反向疏水层析对其进行纯化，实现其大规模制备。结果: 筛选出的高表达工程菌采用80 L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵,在pH 4.0、溶解氧浓度20 %～30 %、罐内压力为10 psi、甲醇诱导48 h时产量最高可达150 mg•L^-1；纯化的hAβ_1-42经SDS-PAGE分析显示单一区带,相对分子质量约为4 200。结论:构建、筛选出高效表达hAβ_1-42的毕赤酵母工程菌,并建立稳定的发酵和纯化制备工艺。

关键词: 发酵, 分离, 提纯

Abstract: Abstract:Objective To study the efficient expression of the human recombinant β-amyloid protein 1-42(hAβ_1-42),and produce hAβ_1-42 by optimized fermentation parameters on large scale using Pichia pastoris as host system.Methods On the base of construction of the recombinant expression vector pPICZα-Aβ_1-42,and the obtained recombinant vector was transformed into the Pichia pastoris.hAβ_1-42 was expressed in 80 L fermentor with optimized parameters and the broth was harvested and purified with SP Sepharose and Source TM 30 RPC.Results hAβ_1-42 in the broth could reach maximal yield of 150 mg•L^-1 after induced by methanol for 48 h.The expressed product was purified from the fermentating culture.Analytic results revealed that the relative molecular mass of obtained product was about 4 200.Conclusion hAβ_1-42 can be expressed in Pichia pastoris on large scale.A stable fermentation and purification technology is successfully set up.

Key words: fermentation, separation, purification

中图分类号:

申茉函，王全才,刘佳伟,韦安慧，朱洁，颜炜群. 重组人β-淀粉样蛋白1-42大规模发酵及纯化工艺[J]. J4, 2009, 35(1): 34-38.

SHEN Mo-han,WANG Quan-cai,LIU Jia-wei,WEI An-hui,ZHU Jie,YAN Wei-qun. Large scale fermentation and purification technologyof recombinant human β-amyloid peptide 1-42[J]. J4, 2009, 35(1): 34-38.

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