ERα AF-1区磷酸化位点突变体的构建及对ERα活性的影响

doi:国家自然科学基金资助课题（30530320；3037

ERα AF-1区磷酸化位点突变体的构建及对ERα活性的影响

宁康^1,2，刘雅娟³，杨怀宁²，范洪学²，杨智洪¹，李熔¹，叶棋浓¹

（1.军事医学科学院生物工程研究所，北京 100850；2.吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室，吉林长春 130021；3.吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，吉林长春 130021）

收稿日期:2006-07-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-03-28 发布日期:2007-03-28
通讯作者: 叶棋浓

Construction of mutants of phosphorylation sites in ERα AF-1 and effects of mutants on transcriptional activity of ERα

NING Kang^1,2,LIU Ya-juan³,YANG Huai-ning²,FAN Hong-xue², YANG Zhi-hong¹,LI Rong¹, YE Qi-nong¹

1.Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850，China； 2.Department of Toxicology,Shcool of Public Health,Jilin University, Changchun 130021,China;3.Department of Nutrition and Food Hygiene,Shcool of Public Health,Jilin University, Changchun 130021,China

Received:2006-07-03 Revised:1900-01-01 Online:2007-03-28 Published:2007-03-28
Contact: YE Qi-nong

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建雌激素受体(ERα) AF1区丝氨酸（Ser）磷酸化位点104、106、118和167位基酸的4个突变体，并在哺乳动物细胞293T中检测突变后对其活性的影响。方法：以pcDNA3-ERα为模板，用重组PCR的方法扩增出编码这4种突变体的基因片段，再将这些片段以正确相位与pcDNA3-FLAG载体中的FLAG编码序列融合。用Western blotting检测融合蛋白的表达，并在哺乳动物细胞293T中检测这些突变体突变后对ERα活性的影响。结果：成功构建了ERα AF1区丝氨酸磷酸化位点104、106、118和167位氨基酸的4个突变体，并在293T细胞中得到表达。活性测定结果表明，在不加雌激素(E2)的情况下，ERα及其突变体的转录活性分别是空载体pcDNA3的3.40 、3.21 、3.02 、3.00和3.54倍；在雌激素的作用下，104、106位氨基酸的突变体对ERα的活性无影响,而118和167位氨基酸的突变体的活性值是ERα的50%。结论：在104、106、118和167这4个ERα AF1区磷酸化位点中，只有118和167位点的丝氨酸的磷酸化是雌激素调节靶基因转录过程中所必需的。

关键词: 雌激素, 反式激活（遗传学）, 点突变

Abstract: To construct the mutants of the four serine phosphorylation sites(104,106,118 and 167) in ERα AF-1 and detect their effects on the transcriptional activity of Erα in 293T cells. Methods The coding sequences of the ERα mutants were amplified by recombinant PCR with pcDNA3-ERα as a template and fused in frame with the coding region of FLAG in the pcDNA3-FLAG vector. The fusion proteins were characterized by Western blotting.The effects of the mutants on the transcriptional activity of ERα were determined. Results ERα mutants were successfully constructed and expressed in 293T cells. The transcriptional activities of ERα and its mutants were 3.40,3.21,3.02,3.00,3.54 times of pcDNA3 in the absence of E2. Only the mutants of 118 and 167 phosphorylation sites made the transcriptional activity reduce to 50% of ERα in the presence of E2. Conclusion Only 118 and 167 phosphorylation sites are necessary during the regulation of estrogen on target gene transcription among the four serine phosphorylation sites(104,106,118 and 167) in ERα AF1.

Key words: estrogen, trans-activation(genetics), point mutation

中图分类号:

R737.9

宁康，刘雅娟，杨怀宁，范洪学，杨智洪，李熔，叶棋浓. ERα AF-1区磷酸化位点突变体的构建及对ERα活性的影响[J]. J4, 2007, 33(2): 200-203.

NING Kang,LIU Ya-juan,YANG Huai-ning,FAN Hong-xue, YANG Zhi-hong,LI Rong, YE Qi-nong. Construction of mutants of phosphorylation sites in ERα AF-1 and effects of mutants on transcriptional activity of ERα[J]. J4, 2007, 33(2): 200-203.

[1]	王娟, 刘文龙, 赵苒, 范春. 双酚A联合己烯雌酚对未成年雌性SD大鼠的雌激素效应[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 731-735.
[2]	何悦铭, 康丽花, 王倩, 王迦南, 宋艳秋. 雌激素受体阳性乳腺癌患者内分泌耐药机制的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(02): 454-458.
[3]	冷冰, 马恩元, 何巍, 蒋为海, 辛建海, 薛昊罡. 17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(04): 763-768.
[4]	孙亚楠, 毛晓韵, 刘崇, 陈浩, 郭扬, 金锋. ERα基因启动子甲基化状态对乳腺癌细胞系MTA1 mRNA和蛋白表达水平的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(04): 706-710.
[5]	杨培培,刘长云,朱海玲,范蒙蒙,徐婕. 外源性雌激素对雄性青春前期大鼠生殖系统的损伤及其自然修复过程[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(03): 554-558.
[6]	赵超悦，宋润敏，秦晖，王娜，杨柳，李江. EMMPRIN糖基化突变质粒的构建及功能检测[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(03): 583-587.
[7]	孙艺学，王爱兵，车冠宇，李子义，张学明. 人α-突触核蛋白A30P突变对小鼠嗅球神经发生的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(01): 74-77.
[8]	李红霞，刘伯锋，姚珍薇，邵勇. 血红素加氧酶1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠肝脏组织和胎鼠脑组织中的表达及其意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 726-729.
[9]	那键，马超，霍维玲，秦瑞云，吴晓东，许永，王涛，谷贵山. 新型Ca²⁺通道TRPV5和TRPV6的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 634-637.
[10]	姚远，冯姝婷，赵鸿梅，李艳. 雌激素受体alpha和肿瘤转移相关因子1在胃癌细胞中的表达和共定位[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(1): 5-7.
[11]	王忠超\|李敏\|张彬\| 任立群\|额都\|张秋丽\| 秀兰\|刘一飞\| 刘蓝涛. 蒙药乳腺-Ⅰ号对乳腺增生大鼠抗氧化能力、乳腺组织雌激素受体和孕激素受体表达的影响[J]. J4, 2012, 38(6): 1058-1062.
[12]	李宝莉\|谷秀娟\|陈雅慧\|张正祥. 酸柏栀油软胶囊对去势大鼠血液流变性的影响及其降血脂作用[J]. J4, 2012, 38(5): 927-931.
[13]	罗玲\|王导新. 雌孕激素对ALI大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞ENaC表达的影响[J]. J4, 2012, 38(5): 836-840.
[14]	官鑫,程熠,李勇,翁熹君,史杰萍,刘雅文. 雌激素受体α基因多态性与2型糖尿病的关联性分析[J]. J4, 2011, 37(5): 861-866.
[15]	付先芸\|魏绍斌. 子宫腺肌病雌激素相关发病机制研究进展[J]. J4, 2011, 37(4): 770-773.