人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

doi:吉林省科学技术厅资助课题（20030434）

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

徐波¹,郑永晨¹,费邵阳²

1．吉林大学第二医院中心实验室,吉林长春 130041；2.吉林省第三人民医院神经外科，吉林四平 136000

收稿日期:2006-11-24 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-09-28 发布日期:2007-09-28
通讯作者: 郑永晨

Cloning,prokaryotic expression and identification of human cell division cycle gene 2

XU Bo¹, ZHENG Yong-chen¹,FEI Shao-yang²

1.Central Laboratory, Second Hospital,Jilin University,Changchun 130041,China; 2.Department of Neurosurgery,Third People’〖KG-*3〗s Hospital of Jilin Province,Siping 136000,China

Received:2006-11-24 Revised:1900-01-01 Online:2007-09-28 Published:2007-09-28
Contact: ZHENG Yong-chen

摘要/Abstract

摘要： 目的：从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2（ CDC2），并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法：从人肝癌组织中提取RNA，采用RT-PCR法扩增CDC2 cDNA，用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物，将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和 XhoⅠ两酶切位点之间，转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果：RT-PCR扩增出约894 bp的DNA片段，与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定，成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论：从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因，并在大肠杆菌中表达。

关键词: 基因克隆, 原核表达

Abstract: Abstract:Objective To clone human cell division cycle gene 2 (CDC2) from human liver cancer tissue and express CDC2 protein in E.coli BL-21(DE3).Methods The total RNA was extracted from liver cancer tissue and amplified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR).The PCR products were cloned into the prokaryotic expression vector pET28a(+) followed by DNA sequencing.The recombinant pET28a(+)/CDC2( rCDC2) plasmid was transformed into E.coli.The rCDC2 was induced with IPTG and characterized by SDS-PAGE.Results The cloned CDC2 gene was composed of 894 nucleotides,and is accordance with that reported in GenBank.The prokaryotic expression vector was constructed successfully.The CDC2 protein was successfully expressed in E.coli.Conclusion The CDC2 cDNA is successfully cloned from huma n liver cancer tissue,and can express in E.coli.

Key words: gene clone, prokaryotic expression

中图分类号:

Q784

徐波,郑永晨,费邵阳. 人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定[J]. J4, 2007, 33(5): 834-836.

XU Bo, ZHENG Yong-chen,FEI Shao-yang. Cloning,prokaryotic expression and identification of human cell division cycle gene 2[J]. J4, 2007, 33(5): 834-836.

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