J4 ›› 2009, Vol. 35 ›› Issue (3): 570-573.

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抑制丙型肝炎病毒 NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义

  

  1. 吉林大学第一医院感染症科|吉林 长春130021
  • 收稿日期:2008-05-08 出版日期:2009-05-28 发布日期:2009-08-14
  • 通讯作者: 牛俊奇 E-mail:junqiniu@yahoo.com.cn
  • 作者简介:苏秀芬(1963-)|女|吉林省九台市人|副主任医师|医学博士|主要从事丙型病毒性肝炎的临床和分子生物学研究。
  • 基金资助:

    卫生部博士点专项基金资助课题[20040183047]

  • Received:2008-05-08 Online:2009-05-28 Published:2009-08-14

摘要:

目的:构建抑制丙型肝炎病毒 NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后线性的pSilencerTM 3.1-H1neo载体的H1启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒,进行电泳,将3个不同的RNAi质粒和阴性对照质粒分别与HCV NS5A真核表达质粒共转染正常肝细胞HL-7702细胞系,用Western  blotting印迹法鉴定 NS5A蛋白表达。结果:对重新构建的pSilencerTM3.1-H1neoHCV  NS5A- R1、R2、R3质粒进行测序,与设计的序列完全相同;3个质粒电泳均在4 348 bp处出现特异性条带;Western blotting印迹法测得R1、R2和R3的 NS5A蛋白未见明显条带,阴性对照质粒 NS5A蛋白在相对分子质量5 600处出现条带。结论:设计合成的3个不同位点的63个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全正确,对HCV NS5A基因表达有特异性抑制作用。

关键词: 丙型肝炎病毒NS5A基因;短发夹RNA;RNA干扰;

Abstract:

Construction of shRNA RNAi system  inhibiting  HCV NS5A gene expression and significance

中图分类号: 

  • Q78