摘要： 目的：合成p53基因突变子及构建真核表达载体,并在HCT116-p53^-/-细胞中建立248W和273H突变子表达模型，为研究p53突变子在肿瘤发生中的作用及通过封闭p53突变子的方法进行肿瘤基因治疗提供实验基础。方法：以野生型p53基因为模板，采用引物重叠PCR定点突变技术，合成p53基因248W和273H突变子，并利用基因重组技术构建出表达载体，用脂质体转染法建立模型，Western blotting检测p53突变子蛋白。结果：经基因测序后证实第248位密码子由精氨酸（CGG）突变为色氨酸（TGG），第273位密码子由精氨酸(CGT)突变为组氨酸（CAT），说明成功合成p53突变子，构建的表达载体转染HCT116细胞后，经Western blotting检测，以特异表达条带与内参GAPDH的比值做为相对值进行半定量比较，特异蛋白表达显著升高，证实模型建立成功。结论：通过引物重叠PCR定点突变技术成功构建p53基因248W和273H突变子，并在HCT116细胞中成功表达。

关键词: p53, 转染, 定点诱变, Western blotting

中图分类号: 

• Q786