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2. 北华大学药学院药物分析 教研室, 吉林 吉林 132013;
3. 吉林雷宁食品药品检测技术服务有限公司, 吉林 吉林 132013
| 吉林大学学报(医学版) 2018, 44(04) 839-844 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180428 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R | ||
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| 方法学 | ||
| 基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定 | ||
| 高丽君1, 何程远1, 李盈诺2, 巴宏宇1, 李梓僮2, 夏薇1, 李明成1, 苑广信2, 张丽华3, 艾金霞1 | ||
| 1. 北华大学医学检验学院临床血液与体液检验教研室, 吉林 吉林 132013; 2. 北华大学药学院药物分析 教研室, 吉林 吉林 132013; 3. 吉林雷宁食品药品检测技术服务有限公司, 吉林 吉林 132013 |
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| 摘要：目的：分析鹿茸线粒体细胞色素b （Cytb）和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因特异性，建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法：利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA，应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物（分别为Cytb1、2和COⅠ1、2、3），采用单一及双重引物分别进行PCR扩增，筛选特异性强的引物，确定最佳PCR反应条件。结果：采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp，DNA纯度即A （260）/A （280）为1.80±0.02；应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪，而引物Cytb 1和COⅠ1组合后，解链温度为58℃时，梅花鹿茸（吉林、安徽）、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段，而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段；采用该提取方法及最优化的PCR反应条件，对市售样品进行检测，检测结果与实际情况完全一致。结论：双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪，该方法特异性高、实用性强，且简便快捷，在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。 | ||
| 关键词： 细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 鹿茸 双重聚合酶链反应 细胞色素b DNA指纹 | ||
| 收稿日期 2017-10-30 修回日期 网络版发布日期 2018-07-27 | ||
| DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180428 | ||
| 基金项目: 吉林省科技厅重点科技成果转化项目资助课题（20160307030YY，20170307001YY）；吉林省发改委产业技术研究与开发项目资助课题（2015Y077）；吉林省教育厅"十二五"科学技术研究项目资助课题（吉教科合字[2015]D143）；国家级大学生创新创业训练计划项目资助课题（201711923018）；吉林省科技厅重点科技攻关项目资助课题（20160204004NY） | ||
| 通讯作者: 艾金霞,副教授,硕士研究生导师(Tel:0432-64608115,E-mail:1047085280@qq.com) | ||
| 作者简介: 高丽君(1969-),女,吉林省吉林市人,副教授,医学硕士,主要从事中药DNA检验方面的研究。 | ||
| Copyright © 2008 by 吉林大学学报(医学版) | ||