吉林大学学报(医学版) 2019, 45(06) 1288-1293 DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190616    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R
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	基础研究
	CRISPR/Cas9介导TKI对非小细胞肺癌基因靶向吉非替尼耐药敏感性的影响及其机制
	任爱华1, 王大伟2
	1. 北华大学医学院解剖教研室, 吉林 吉林 132013; 2. 北华大学医学院病理教研室, 吉林 吉林 132013
	摘要：目的：探讨CRISPR/Cas9介导酪氨酸激酶抑制剂（TKI）对非小细胞肺癌基因靶向吉非替尼耐药敏感性的影响，并阐明其机制。方法：利用CRISPR/Cas9系统建立酪氨酸激酶（TKs）敲除A549细胞株，按照TKI表达情况分为A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株。Western blotting法检测细胞株中P53、MDM2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平，CCK-8法检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞活性，细胞划痕实验检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株的细胞迁移情况，流式细胞术检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞凋亡率，克隆形成实验检测细胞集落形成情况。结果：CRISPR/Cas9系统成功建立了TKs敲出A549细胞株，A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞活性比较差异无统计学意义（P>0.05）；3种细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P>0.05），细胞迁移情况变化不大。经6 mol·L-1吉非替尼干预72 h后，与A549细胞株比较，A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株的细胞活性降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞划痕愈合率明显降低（P<0.05），细胞迁移能力明显减弱；与A549细胞株比较，A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株中P53和Bax蛋白表达水平降低（P<0.05），MDM2和Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05），细胞集落生成率明显降低（P<0.05）。结论：采用吉非替尼对敲除A549细胞株进行干预可以降低细胞活性和迁移能力，升高细胞凋亡率和吉非替尼耐药的敏感性。
	关键词： CRISPR/Cas9 酪氨酸激酶抑制剂 癌,非小细胞肺 吉非替尼 耐药
	收稿日期  2018-12-25   修回日期    网络版发布日期  2019-12-05
	DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190616
	基金项目: 吉林省科技厅自然科学基金资助课题（20190201052JC）
	通讯作者: 王大伟,教授,硕士研究生导师(Tel:0432-64608052,E-mail:dw-wang@163.com)
	作者简介: 任爱华(1976-),男,河北省唐山市人,讲师,医学硕士,主要从事解剖病理学方面的研究。
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