筛选靶向上调雌激素受体β（ERβ）转录和表达的人参皂苷单体，研究其对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其机制。

采用PGL2-ERβ和内参Renilla荧光素酶质粒Prep7-Rluc共同转染HEK293T细胞，细胞分为对照组，雌二醇组（1×10^－6 mmol·L^－1），人参皂苷Rb1组、Rb2组、Rd组、Rg1组、Rg2组和Rh1组（1×10^－5 mmol·L^－1），通过双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞双荧光素酶活性。进一步将MC3T3-E1细胞分为对照组、雌二醇组和不同浓度（1×10^－6、1×10^－5及1×10^－4 mmol·L^－1）人参皂苷Rh1组，采用Western blotting法检测各组MC3T3-E1细胞中ERβ蛋白表达水平。通过Auto Dock分子对接实验，模拟人参皂苷Rh1与ERβ蛋白分子的结合情况。MC3T3-E1细胞分为对照组、雌二醇组和不同浓度（5×10^－6、1×10^－5、5×10^－5、1×10^－4、1×10^－3及5×10^－3 mmol·L^－1）人参皂苷Rh1组，分别作用24、48和72 h后，采用CCK-8法检测各组细胞增殖率。MC3T3-E1细胞分为对照组、雌二醇组（1×10^－6 mmol·L^－1）和不同浓度（1×10^－5及1×10^－4 mmol·L^－1）人参皂苷Rh1组，配制成骨诱导液，分别诱导MC3T3-E1细胞7、14和21 d，采用碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色检测细胞中ALP和钙化结节染色面积，观察人参皂苷Rh1对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。

双荧光素酶报告基因实验，各组HEK293T细胞中转染ERβ-PGL2质粒后，与对照组比较，1×10^－5 mmol·L^－1人参皂苷Rh1组细胞荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。 Western blotting法检测，与对照组比较，不同浓度人参皂苷Rh1组细胞中ERβ蛋白表达水平明显升高（P<0.05），且1×10^－4 mmol·L^－1人参皂苷Rh1组细胞中ERβ蛋白表达水平最高。Auto Dock分析，人参皂苷Rh1可以结合在ERβ蛋白的配体结合口袋内。CCK-8实验，培养24、48和72 h后，与对照组比较，1×10^－5、5×10^－5、1×10^－4和1×10^－3 mmol·L^－1人参皂苷Rh1组MC3T3-E1细胞增殖率均明显升高（P<0.01），其中72 h时1×10^－4 mmol·L^－1人参皂苷Rh1组细胞增殖率最高。成骨诱导分化后，与对照组比较，不同浓度人参皂苷Rh1组细胞中ALP染色面积明显增加，1×10^－4 mmol·L^－1人参皂苷Rh1组细胞中ALP染色面积最大，而且14 d时ALP染色面积较7 d时明显增加，具有时间和浓度依赖性；与对照组比较，不同浓度人参皂苷Rh1组细胞矿化结节茜素红染色面积明显增加。

人参皂苷Rh1能够明显促进成骨细胞的增殖和分化，其机制可能与其靶向上调细胞中ERβ的转录和表达有关。