吉林大学学报(医学版) 2021, 47(4) 904-910 DOI: 10.13481/j.1671-587X.20210412    ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R

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基础研究
靶向沉默ATRX对辐射诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和凋亡的作用
秦丽晶1,韩冰2,李忠起3,索齐4,贾臻1,崔红丽1,徐维强1,方芳1(),王志成1()
1.吉林大学公共卫生学院 国家卫健委放射生物学重点实验室,吉林 长春 130021
2.吉林大学 第二医院放射线科,吉林 长春 130041
3.吉林国际旅行卫生保健中心,吉林 长春 130062
4.吉林省长春爱尔汇锋眼科医院,吉林 长春 130041
摘要目的

靶向沉默HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),探讨其对辐射诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用。

方法

利用RNA干扰(RNAi)技术建立稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,命名为shATRX1-HeLa,以shCon-HeLa为阴性对照。分别给予0、2和8 Gy X射线照射后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,采用PI单染和流式细胞术检测各组细胞中G0/G1、S和G2/M期细胞百分率,采用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞中多聚(腺苷酸二磷酸核糖基)聚合酶1(PARP1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 9(cleaved caspase-9)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved caspase-3)蛋白表达情况。

结果

0、2和8 Gy X射线照射后0、6、10、24和48 h,与shCon-HeLa组比较,不同照射剂量 shATRX1-HeLa组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。0和2 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较, shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率和细胞凋亡率则明显升高(P<0.05);8 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较,shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显升高(P<0.05),而G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与shCon-HeLa组比较,经2和8 Gy照射后24和48 h,shATRX1-HeLa组细胞中PARP1、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表达均明显增加。

结论

靶向沉默HeLa细胞ATRX可降低辐射诱导的细胞G2/M期阻滞、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,本研究结果为肿瘤放疗提供了新的分子靶点。

关键词: 辐射 α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白 宫颈肿瘤 细胞周期阻滞 细胞凋亡 细胞增殖
收稿日期  2021-01-29   修回日期    网络版发布日期  2021-07-22  
DOI: 10.13481/j.1671-587X.20210412
基金项目: 吉林省卫健委卫生专项项目(2020SCZT066);吉林省教育厅科学研究项目(JJKH20211140KJ);吉林大学白求恩计划项目(2020B06)
通讯作者: 方芳,王志成
作者简介: 秦丽晶(1995-),女,内蒙古自治区兴安盟人,在读硕士研究生,主要从事辐射生物效应方面的研究。

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