吉林大学学报(医学版) 2022, 48(2) 356-363 DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220212 ISSN: 1671-587X CN: 22-1342/R | ||
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基础研究 | ||
芦丁对人结肠癌SW480细胞凋亡的促进作用及其作用机制 | ||
陈素贤1,谷泽慧1,马炀斐1,谭琦1,李琪1,王亚帝2(![]() |
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1.锦州医科大学附属第三医院病理科, 辽宁 锦州 120001 2.锦州医科大学附属第三医院 精准医学中心, 辽宁 锦州 120001 |
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摘要: 探讨芦丁对人结肠癌(CRC)SW480细胞凋亡的影响,阐明芦丁在CRC治疗中的作用及其可能的分子机制。 毒性与基因比较数据库(CTD)和GeneCards数据库预测与芦丁相关的交集mRNA,基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库预测交集mRNA的生物学功能及作用通路,采用String数据库寻找与Notch-1相关作用蛋白;以人CRC SW480细胞作为研究对象,分别给予0.1、1.0和10.0 μmol·L-1 γ-分泌酶抑制剂DAPT初步筛选,进而给予1、2、4、8和10 μmol·L-1 DAPT干预,筛选出芦丁与DAPT的最适给药浓度。实验分为空白对照组、芦丁组(22 μmol·L-1)、 DAPT组(1 μmol·L-1)和芦丁+DAPT组(22 μmol·L-1芦丁+1 μmol·L-1 DAPT);MTT法检测SW480细胞增殖活性,Hoechst33258核染色观察各组细胞凋亡形态,流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中Notch-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中,Notch-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(caspase-9)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。 CTD和GeneCards数据库共有芦丁的34个交集mRNA;GO和KEGG数据库预测出交集mRNA与CRC细胞凋亡过程相关;String数据库中与Notch-1相关蛋白16个[相互作用分数(score)>0.42];芦丁与DAPT的最适给药浓度分别为22 μmol·L-1和1 μmol·L-1。与空白对照组比较,芦丁组、DAPT组和芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Notch-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),细胞中caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。芦丁组与DAPT组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与芦丁组和DAPT组比较,芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。 生物信息学分析及实验研究结果均表明芦丁能促进CRC细胞凋亡,这一作用可能是通过靶向调控Notch-1调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路来实现的。 |
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关键词: 芦丁 DAPT 结肠肿瘤 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶 Notch-1 | ||
收稿日期 2021-06-21 修回日期 网络版发布日期 2022-05-10 | ||
DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220212 | ||
基金项目: 辽宁省科技厅重点研发指导计划项目(2019JH8-10300040) | ||
通讯作者: 王亚帝 | ||
作者简介: 陈素贤(1972-),女,辽宁省锦州市人,副教授,医学博士,主要从事女性生殖系统肿瘤方面的研究。 | ||
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