探讨载转化生长因子β3（TGF-β3）甲基丙烯酰化肝素（HepMA）对牙髓干细胞（DPSCs）成骨分化能力的促进作用，阐明其可能的作用机制。

体外分离培养人牙髓干细胞（hDPSCs）并通过流式细胞术进行细胞鉴定。合成光固化HepMA水凝胶，利用扫描电子显微镜观察材料表面形态特征。合成载不同浓度（20、40、60、80和100 μg?L^－1）TGF-β3的HepMA（TGF-β3-HepMA），采用其浸提液分别培养hDPSCs 1、3和5 d，同时设对照组，采用 CCK-8 法筛选出载TGF-β3的最适浓度。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各时间点TGF-β3-HepMA中TGF-β3的累积释放量并绘制药物释放曲线。hDPSCs分为对照组、HepMA组和载最适浓度TGF-β3的 HepMA（TGF-β3-HepMA）组，加入含有相对应浸提液的培养基培养24 h，配制成骨诱导液分别诱导hDPSCs 7、14和21 d，采用碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色法检测各组细胞ALP染色及钙结节形成情况，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中成骨相关因子mRNA表达水平。

分离培养的hDPSCs在光学显微镜下观察呈长梭形；流式细胞术检测，培养的hDPSCs中 CD105和CD90呈阳性表达，CD34和CD45呈阴性表达，验证本研究中分离培养的细胞为hDPSCs。扫描电子显微镜（SEM）观察，HepMA平均孔径为50~70 μm。ELISA法检测，TGF-β3在7 d内呈突释阶段后缓慢释放，21 d左右达到平衡。CCK-8法检测，与0 μg?L^－1 TGF-β3-HepMA组比较，20、40和60 μg?L^－1 TGF-β3-HepMA组hDPSCs增殖率呈剂量依赖性升高（P<0.05），故载TGF-β3的最适浓度为60 μg?L^－1。成骨诱导7和14 d时，与对照组和HepMA组比较，TGF-β3-HepMA组细胞中ALP染色面积最大且染色颜色最深，14 d时细胞中ALP染色较7 d时更加明显；成骨诱导21 d时，与对照组和HepMA组比较，TGF-β3-HepMA组细胞中茜素红染色的矿化钙结节面积最大。RT-qPCR法检测，培养7和14 d时，与对照组比较，HepMA组和TGF-β3-HepMA组细胞中Runt相关转录因子2（Runx2）、ALP、骨钙桥素（OCN）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ） mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）；与HepMA组比较，TGF-β3-HepMA组细胞中 Runx2、ALP、OCN和COL-Ⅰ mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。

载TGF-β3的HepMA能够提高hDPSCs成骨分化能力，其机制可能与上调成骨相关因子的表达有关。