目的 探讨黄芪甲苷（ASⅣ）对低氧诱导的小鼠血管损伤的保护作用，并阐明其可能的作用机制。 方法 60只雄性健康昆明小鼠随机分为对照组，低氧组，低、中和高剂量（40、80和120 mg·kg^－1）ASⅣ组。低氧组和不同剂量ASⅣ组小鼠在低氧舱（氧浓度10%）中饲养，连续4周，低、中和高剂量ASⅣ组小鼠于低氧第2天灌胃给药，连续4周。离体血管环实验检测各组小鼠血管张力，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，免疫组织化学法检测各组小鼠胸主动脉组织中骨膜蛋白（POSTN）阳性细胞率，Western blotting法检测各组小鼠胸主动脉组织中POSTN、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）和磷酸化核因子κB（p-NF-κB）p65蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，低氧组小鼠乙酰胆碱（Ach）最大舒张率明显降低（P<0.01）；与低氧组比较，低剂量ASⅣ组小鼠Ach最大舒张率差异无统计学意义（P>0.05），中和高剂量ASⅣ组小鼠Ach最大舒张率明显升高（P<0.01）。ELISA法检测，与对照组比较，低氧组小鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显升高（P<0.01）；与低氧组比较，低、中和高剂量ASⅣ组小鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学法，对照组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率极低；与对照组比较，低氧组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率明显升高（P<0.01）；与低氧组比较，低剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率差异无统计学意义（P>0.05），中和高剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率明显降低（P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组比较，低氧组小鼠胸主动脉组织中POSTN、ICAM-1、VCAM-1 和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与低氧组比较，低剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN、ICAM-1、VCAM-1 和p-NF-κB p65蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05），中和高剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN、ICAM-1、VCAM-1和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 ASⅣ可改善低氧诱导小鼠血管内皮功能障碍和炎症反应，其作用机制可能与调控POSTN/NF-κB信号通路有关。

目的 基于重叠延伸PCR（SOE PCR）技术构建转录因子EB（TFEB）丝氨酸114位点突变体原核表达质粒，并进行体外诱导表达和纯化。 方法 根据SOE PCR技术原理设计突变引物，以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板，分别采用外侧引物F和R及突变引物F_n和R_n进行第1步PCR扩增，获得含突变位点的产物1和产物2。经第2步PCR退火延伸对产物1和产物2进行重叠拼接，以拼接后DNA片段为模板，采用外侧引物F和R进行第3步PCR扩增获得含突变位点的目的DNA；将其克隆至pGEX-6p-1载体，采用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ进行酶切鉴定，DNA测序验证突变结果。于大肠杆菌（E.coli）中分别采用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在不同条件下诱导TFEB及其突变体重组蛋白表达。Glutathione-Sepharose 4B琼脂糖凝珠分离纯化蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化产物蛋白浓度和相对分子质量。 结果 第1步PCR扩增获得均含有突变位点的2条DNA片段，经第2步PCR退火延伸和第3步PCR扩增后获得大量含有突变位点的完整DNA片段。双酶切鉴定，连接的DNA片段与目的片段大小一致。DNA测序显示TFEB的114位丝氨酸（TCT）成功突变为丙氨酸（GCT）。在0.5?mmol·L^－1 IPTG、16?℃诱导过夜条件下获得TFEB及其突变体的可溶性蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳，纯化后蛋白浓度较高，分子大小正确。 结论 利用SOE PCR技术成功实现了TFEB丝氨酸114位点的定点突变，并且TFEB及其突变体基因在E.coli中成功表达。

目的 探讨牛蒡苷元对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠血清中代谢物的影响，阐明牛蒡苷元对脑缺血-再灌注损伤保护作用的分子机制。 方法 将18只SPF SD大鼠随机分成假手术组、模型组和牛蒡苷元组，每组6只。牛蒡苷元组大鼠灌胃给予100 mg·kg^－1牛蒡苷元，假手术组和模型组大鼠灌胃给予相同剂量生理盐水，连续灌胃14 d。采用改良线栓法制备脑缺血-再灌注大鼠模型。再灌注24 h后，评估各组大鼠神经功能缺损评分，HE染色观察各组大鼠大脑皮层缺血半暗带组织病理形态表现，代谢组学技术检测各组大鼠血清中代谢物水平。 结果 与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高（P<0.05），脑组织形态明显改变并可见少量胶质细胞增生，血清中14个代谢物包括3，3'，4'，5-四羟基二苯乙烯和二十二碳六烯酸（DHA）等水平明显降低（P<0.05），12个代谢物包括肌肽等水平明显升高（P<0.05）；与模型组比较，牛蒡苷元组大鼠神经功能缺损评分明显降低（P<0.05），神经元损伤得到改善，血清中14个代谢物包括3，3'，4'，5-四羟基二苯乙烯和DHA等水平明显升高（P<0.05），12个代谢物包括肌肽等水平明显降低（P<0.05）。 结论 牛蒡苷元可能通过调控DHA、3，3'，4'，5-四羟基二苯乙烯和肌肽等代谢物参与组氨酸代谢及精氨酸和脯氨酸代谢等氨基酸代谢通路起到抗脑缺血-再灌注损伤作用。

目的 研究致病菌铜绿假单胞菌寡核苷酸酶（PaOrn）的三维结构和体外水解活性，验证PaOrn活性位点并探讨PaOrn对铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）胞内3'，5'-环二鸟苷（c-di-GMP）水平和致病毒性的影响。 方法 构建重组质粒pET 32M3C-PaOrn，在大肠杆菌（E.coli）BL21中诱导表达目的蛋白，获得组氨酸（His）标签和谷胱甘肽（GST）标签标记。采用多级纯化方法纯化蛋白，经Ni亲和层析、GST亲和层析和阴离子交换层析后获得高纯度和高均一性PaOrn目的蛋白。采用商业化结晶试剂和坐滴法筛选晶体，根据晶体状态进一步优化。采用X射线衍射法验证晶体质量，分辨率高于3 ?时用于结构解析。采用高分辨质谱技术Q TOF验证PaOrn蛋白水解底物二鸟苷磷酸（pGpG）活性，鸟苷单磷酸（GMP）产物作为验证活性的指标。采用尿素聚丙烯酰胺（Urea-PAGE）法验证PaOrn蛋白和点突变PaOrn蛋白（Orn^D11A、Orn^E13A、Orn^D111A、Orn^H157A和Orn^D162A）对10 nt长度寡核苷酸RNA的水解活性，降解条带作为活性正常的分析指标。 结果 经原核系统表达和多级纯化，得到纯度高达95%的目的蛋白PaOrn。于结晶试剂Wizard Ⅰ#12［1.0 mmol·L^－1（NH₄）₂HPO₄，0.1 mmol·L^－1 Imidazole］ pH 8.0条件下生长出质量较好的单晶，晶体PaOrn的分辨率为1.85 ?，复合物PaOrn-GMP和PaOrn^D11A-pGpG的分辨率分别为1.90 ?和1.70 ?。高分辨质谱，PaOrn将底物pGpG水解为GMP。尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳，PaOrn可降解长达10 nt的RNA，当活性位点Asp11、Glu13、Asp111、His157和Asp162分别突变后，PaOrn丧失活性，无法降解底物pGpG和RNA（10 nt）。 结论 PaOrn通过降解寡核苷酸参与调控胞内c-di-GMP和RNA水平，影响转录起始和细胞多种生物学行为。

目的 探讨梅花草提取物对幽门螺杆菌（Hp）根除和胃黏膜的影响，阐明其在体内外抑菌消炎的机制。 方法 6周龄雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、Hp组、三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组。琼脂稀释法检测梅花草对Hp SS1标准株的最小抑菌浓度（MIC），实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测Hp定植黏附相关基因 mRNA表达水平。动物实验评估不同治疗方式对Hp的根除率，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，快速尿素酶试验（RUT）检测各组小鼠胃组织中Hp感染率，HE染色和透射电镜观察小鼠胃组织病理形态表现和超微结构。 结果 梅花草的MIC为10 g·L^－1。RT-qPCR法检测，与Hp组比较，梅花草组Hp定植黏膜相关基因Bab A、Cag A和Vac A mRNA表达水平均降低（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学检测，Hp组小鼠胃黏膜部分糜烂和溃疡，出血和充血明显，Hp感染阳性；梅花草组小鼠胃黏膜出血和溃疡明显改善，胃黏膜Hp感染呈阴性。RUT实验检测，与Hp组比较，梅花草组小鼠Hp感染率降低（P<0.05），三联组和四联组小鼠Hp感染率降低（P<0.05）；与梅花草组比较，三联组和四联组小鼠Hp根除率差异无统计学意义（P>0.05）；与三联或四联组比较，三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠Hp根除率升高（P<0.01）。三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠胃黏膜组织得到修复，胃黏膜上皮细胞的线粒体亚细胞器和微绒毛结构完整。与Hp组比较，三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠血清中IL-2水平均升高（P<0.05），IL-8和TNF-α 水平均降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 梅花草可以有效根除Hp和保护胃黏膜，其作用机制与降低Hp感染后IL-2、IL-8和TNF-α水平及保护胃黏膜亚细胞结构完整性有关。

目的 探讨当归红芪超滤物（UFE-AH）对X射线引起人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用，阐明其可能的机制。 方法 体外培养 HUVECs，采用不同剂量（0、2、4、6、8和10 Gy）X射线辐射，筛选出最佳辐射剂量（6 Gy）；用不同浓度（0、50、100、200、400、600、800和1 000 μg·L^－1）UFE-AH干预HUVECs，筛选出最佳促增殖浓度（100、200和400 μg·L^－1）。实验分为空白组、模型组（6 Gy X射线）、低剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+100 μg·L^－1 UFE-AH）、中剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+200 μg·L^－1 UFE-AH）和高剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+400 μg·L^－1 UFE-AH）。CCK-8法检测各组细胞存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构，Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）蛋白表达水平。 结果 CCK-8法检测，与0 Gy比较，当辐射剂量大于2 Gy时，辐射后48和72 h X射线对HUVECs的抑制率随辐射剂量增加而升高（P<0.05或P<0.01），6 Gy及6 Gy以上辐射剂量细胞抑制率升高更明显（P<0.01）。与0 μg·L^－1 UFE-AH比较，100、200、400和600 μg·L^－1UFE-AH作用时细胞存活率升高（P<0.05或P<0.01），且100、200和400 μg·L^－1UFE-AH作用24、48和72 h时细胞存活率明显升高（P<0.01）。与空白组比较，模型组细胞存活率明显降低（P<0.01）；与模型组比较，中和高剂量UFE-AH 组细胞存活率明显升高（P<0.01）。流式细胞术检测，与空白组比较，模型组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）；与模型组比较，低、中和高剂量UFE-AH组细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）。透射电子显微镜观察，空白组细胞膜完整，胞质较均匀，线粒体呈卵圆形，未见明显肿胀，胞内可见少量溶酶体；与空白组比较，模型组细胞重度肿胀，细胞膜多处破损，胞质稀松且出现多个空泡区，细胞核呈轻度不规则形，线粒体数量明显减少，呈轻度或中度肿胀，基质变浅且不均，线粒体少部分嵴局部断裂、变短，胞内可见较大量自噬溶酶体（ASS）；与模型组比较，低、中和高剂量UFE-AH组细胞肿胀减轻，胞内细胞器空泡逐渐减少，线粒体肿胀减轻，数量增多，胞内可见一定量ASS，但仍未恢复正常。Western blotting 法检测，与空白组比较，模型组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显降低（P<0.01），Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.01）；与模型组比较，中和高剂量 UFE-AH组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显升高（P<0.01），Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显降低（P<0.01）。 结论 一定剂量的UFE-AH对X射线引起的HUVECs 损伤具有保护作用，其机制可能与UFE-AH影响HUVECs中PI3K、Akt、p-Akt、VEGF、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达有关。

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.g-LPS）对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响，阐明铁死亡相关因子在牙周炎发病机制中的作用。 方法 培养小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞，分为实验组和对照组，实验组加入10 mg·L^－1P.g-LPS 分别处理6 、12 和24 h，对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组RAW264.7细胞中长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和转铁蛋白受体1（TfR1）mRNA表达水平，2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测2组RAW264.7细胞中活性氧（ROS）水平，硫代巴比妥酸（TBA）法检测2组RAW264.7细胞中丙二醛（MDA）水平，亚铁离子荧光探针（FeRhonox-1）法检测2组RAW264.7细胞中亚铁离子（Fe²⁺）水平，Western blotting法检测2组RAW264.7细胞中ACSL4、GPX4和TfR1蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，处理6、12和24 h后，实验组RAW264.7细胞中GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05），处理12和24 h后ACSL4和TfR1 mRNA表达水平升高（P<0.05）；处理12和24 h后，实验组RAW264.7细胞中ACSL4和TfR1蛋白表达水平升高（P<0.05），GPX4蛋白表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较，实验组RAW264.7细胞中ROS、MDA和Fe²⁺水平升高（P<0.05），且随时间增加呈上升趋势。 结论 P.g-LPS诱导下RAW264.7细胞中铁死亡相关因子ACSL4和TfR1表达水平升高，而GPX4表达水平降低，并且呈时间依赖性，提示上述铁死亡相关因子的变化可能与牙周炎发病机制有关。

目的 探讨黄芪对于大黄诱导腹泻大鼠肠道炎症、肠道屏障和肠道菌群的治疗作用，并阐明其可能的作用机制。 方法 50只大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组（2.468 g·kg^－1参苓白术散）、低剂量（1.35 g·kg^－1）黄芪组和高剂量（2.70 g·kg^－1）黄芪组，每组10只。采用大黄灌胃结合饮食不节复制大鼠腹泻模型，检测各组大鼠体质量、粪便含水量和腹泻评分；HE染色观察各组大鼠结肠组织病理形态表现，Western blotting法检测各组大鼠结肠组织中蛋白酶激活受体2（PAR-2）、磷酸化p38（p-p38）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）、闭锁蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、髓样分化因子88（MyD88）和核因子κB（NF-κB）蛋白表达水平；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠血清中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、丙二醛（MDA）和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性；16S r DNA 基因测序分析各组大鼠肠道菌群情况。 结果 与对照组比较，模型组大鼠体质量明显降低（P<0.01），粪便含水量和腹泻评分明显升高（P<0.01），血清中MTL和GAS水平明显升高（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠体质量明显升高（P<0.01），粪便含水量和腹泻评分明显降低（P<0.01），血清中MTL和GAS水平明显降低（P<0.01）。HE染色，与对照组比较，模型组大鼠结肠组织上皮黏膜损伤，有大量炎症细胞浸润，腺体排列紊乱；与模型组比较，阳性对照组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构较规则，炎症细胞浸润较少，未见明显腺体紊乱，低剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构可见轻微损伤，有部分炎症细胞浸润，腺体排列较整齐。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显升高（P<0.01），ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01），ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较，模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显升高（P<0.01），IL-10和SIgA水平及SOD活性明显降低（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显降低（P<0.01），IL-10和SIg A水平及SOD活性明显升高（P<0.01）。肠道菌群检测，在门水平上，与对照组比较，模型组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显升高（P<0.01）；与模型组比较，低和高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显降低（P<0.01），高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中ε-变形菌门丰度明显升高（P<0.01）。 结论 黄芪对大黄诱导的腹泻模型大鼠有治疗作用，其机制可能与通过TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路抑制肠道炎症，进而修复肠道屏障，恢复肠道菌群组成有关。

目的 探讨桑黄酸性多糖（PIP）对胆管结扎（BDL）所致小鼠肝纤维化的改善作用，阐明其可能的作用机制。 方法 60只4周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组和PIP给药组（PIP组），每组15只。对照组小鼠只绕胆总管穿过手术线但不结扎，模型组、阳性药组和PIP组小鼠结扎胆管。术后给药3周，末次给药12 h后眼球取血，处死小鼠。称量小鼠体质量和肝脏质量，并计算肝脏指数；微板法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平；双抗体夹心法检测各组小鼠血清中Ⅲ型前胶原（PC Ⅲ）和Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）水平；HE染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝组织病理形态表现和肝纤维化程度；检测各组小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平。Western blotting法检测各组小鼠肝组织中核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，模型组小鼠体质量差异无统计学意义（P>0.05），肝脏质量和肝脏指数均升高（P<0.05）；与模型组比较，PIP组小鼠体质量无明显变化（P>0.05），肝脏质量和肝脏指数降低（P<0.05）。HE染色，对照组小鼠肝组织无异常表现；模型组小鼠肝组织中肝小叶结构破坏，可见灶状液化性肝坏死和较多炎症细胞浸润；与模型组比较，阳性药组和PIP组小鼠肝组织坏死程度明显减轻，炎症细胞浸润减少。天狼猩红染色，与对照组比较，模型组小鼠肝组织中胶原纤维含量明显增加；与模型组比较，PIP组小鼠肝组织胶原纤维含量明显减少。与对照组比较，模型组小鼠血清中ALT和AST水平明显升高（P<0.01），PC Ⅲ和Col Ⅳ水平明显升高（P<0.05），小鼠肝组织中SOD和GSH-Px活性明显降低（P<0.01），MDA和GSH水平明显升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，阳性药组和PIP组小鼠血清中ALT和AST水平明显降低（P<0.01），PC Ⅲ和Col Ⅳ水平明显降低（P<0.05或P<0.01），小鼠肝组织中SOD和GSH-Px活性升高（P<0.05），GSH和MDA水平降低（P<0.05）。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组小鼠肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平均降低（P<0.05）；与模型组比较，PIP组小鼠肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。 结论 PIP能改善BDL导致的小鼠肝纤维化，其作用机制可能与降低肝脏氧化应激水平，调节Nrf2/HO-1信号通路中关键因子Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平有关。

目的 探讨人参皂苷Rg1对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠心脏损伤的保护作用，阐明其相关分子机制。 方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和Rg1处理组，每组6只。对照组大鼠开腹后闭腹；模型组大鼠开腹后逆行向胆胰管内注射5%牛磺胆酸钠（0.15 μL·kg^－1）诱导SAP； Rg1处理组大鼠术前30 min经尾静脉注射Rg1（4 mg·kg^－1），制备SAP模型；对照组和模型组大鼠术前30 min尾静脉注射生理盐水。酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、内毒素、内皮素1（ET-1）、白细胞介素1β（IL-1β）水平及肌酸激酶MB（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）和淀粉酶活性。超声成像系统检测各组大鼠心率（HR）、左室收缩末期内径（LVDs）和左室舒张末期内径（LVDd），并计算左室短轴缩短率（FS）。Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NOX）2、NOX4、磷酸化p38（p-p38）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。 结果 ELISA法检测，与对照组比较，模型组大鼠血清中TNF-α、内毒素、IL-1β和ET-1水平均明显升高（P<0.05），CK-MB、cTnI和淀粉酶活性均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，Rg1处理组大鼠血清中TNF-α、内毒素、IL-1β和ET-1水平降低（P<0.05），CK-MB、cTnI和淀粉酶活性降低（P<0.05）。超声心动图，与对照组比较，模型组大鼠HR和LVDs明显增加（P<0.05），LVDd差异无统计学意义（P>0.05），FS明显降低（P<0.05）；与模型组比较，Rg1处理组大鼠LVDs明显减小（P<0.05），LVDd差异无统计学意义（P>0.05），FS明显升高（P<0.05）。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组大鼠心肌组织中NOX2、NOX4、p-p38、p-ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，Rg1处理组大鼠心肌组织中NOX2、NOX4、p-p38、p-ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。 结论 Rg1对SAP大鼠心脏损伤具有一定保护作用，其机制可能与Rg1抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路进而降低心肌组织氧化应激有关。

目的 探讨发酵红参总皂苷（FRGTS）对高糖诱导下肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化（EMT）的抑制作用，并阐明其作用机制。 方法 将大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞分为正常对照组（5.5 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、高糖组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10.0 μmol·L^－1.EX527）、FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋25 mg·L^－1FRGTS）和EX527+FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10 μmol·L^－1 EX527＋25 mg·L^－1FRGTS）。采用免疫荧光法检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA和SIRT1 mRNA表达水平，ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原（ColⅠ）水平，Western blotting 法检测各组细胞中SIRT1、转化生长因子β1（TGF-β1）和Smad3 蛋白表达水平。 结果 高糖培养48 h后，与正常对照组比较，高糖组NRK-52E细胞中E-cadherin 蛋白表达水平和mRNA表达水平降低（P<0.01），α-SMA 蛋白表达水平和mRNA表达水平升高（P<0.01），NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.01），SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01），TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高（P<0.01）；与高糖组比较，FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平升高（P<0.01），α-SMA mRNA表达水平降低（P<0.05），NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平降低（P<0.05），SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05或P<0.01），TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）；与FRGTS组比较，EX527+FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低（P<0.01），α-SMA mRNA表达水平明显升高（P<0.05），NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.05），SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01），TGF-β1和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。 结论 FRGTS可通过上调SIRT1表达，进而抑制TGF-β1/Smad信号通路，有效抑制肾小管上皮细胞发生EMT。

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）接头分子髓样分化因子88（MyD88）和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1（IL-1）受体（TIR）结构域衔接蛋白（TRIF）基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用，初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。 方法 体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7，采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，定向敲除MyD88和TRIF基因（MyD88-KO组和TRIF-KO组），设未感染的Raw264.7细胞为对照组，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^－1乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1（Arg1） mRNA表达水平，光学显微镜下观察各组细胞形态表现，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（INF-γ）和白细胞介素10（IL-10）水平，Western blotting法检测各组细胞中核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。 结果 采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后，与对照组比较，MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。乳酸作用24 h后，与未处理Raw264.7细胞组比较，Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）；与MyD88-KO组比较，MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高（P<0.05）；与TRIF-KO组比较，TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低（P<0.05）。细胞形态表现， Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态，即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加；MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化；TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测，与未处理Raw264.7细胞组比较，Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低（P<0.05），INF-γ和IL-10水平差异无统计学意义（P>0.05）；与MyD88-KO组比较，MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低（P<0.05），INF-γ水平差异无统计学意义（P>0.05），IL-10水平明显升高（P<0.05）；与TRIF-KO组比较，TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高（P<0.05），INF-γ和IL-10水平差异无统计学意义（P>0.05）。Western blotting法检测，与未处理Raw264.7组比较，Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05），Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α（IκB-α）和p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与MyD88-KO组比较，MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与TRIF-KO组比较，TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。分子对接，乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4，结合能分别为－2.72、－3.24和－3.66。 结论 乳酸作用巨噬细胞后，可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB，促进M2极化。

目的 探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）在结扎诱导的慢性牙周炎模型大鼠肾损伤中的变化，阐明SIRT1对慢性牙周炎模型大鼠肾损伤的影响。 方法 20只大鼠随机分为对照组和牙周炎组，每组10只。采用结扎双侧上颌第一磨牙颈部建立大鼠牙周炎模型。肉眼观察2组大鼠牙龈色形质，检测并记录牙龈出血指数（BI）、牙周探诊深度（PD）和牙齿松动度（TM），苏木素-伊红（HE）染色观察2组大鼠牙周组织病理形态表现，微型计算机断层成像（Micro-CT）评价2组大鼠牙槽骨吸收情况，HE和PAS染色观察2组大鼠肾组织病理形态表现，生化试剂盒检测2组大鼠肾脏功能指标和氧化应激水平，Western blotting法检测2组大鼠肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和核因子κB（NF-κB） p65蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和免疫组织化学法检测2组大鼠肾组织中SIRT1和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）mRNA及蛋白表达水平。 结果 牙周组织临床指标，与对照组比较，牙周炎组大鼠牙龈肿胀，质地松软，可探及深牙周袋，探诊易出血，牙齿出现不同程度松动。牙周组织HE染色和Micro-CT观察，与对照组比较，牙周炎组大鼠出现附着丧失，牙槽骨吸收。肾组织HE和PAS染色观察，与对照组比较，牙周炎组大鼠肾组织中肾小囊腔扩张，肾小球基底膜轻度增厚，肾小管上皮细胞脱落，刷状缘破坏。生化检测，2组大鼠肾脏功能指标比较差异无统计学意义（P>0.05）；与对照组比较，牙周炎组大鼠肾组织中总抗氧化状态（TAS）、锰-超氧化物歧化酶（Mn-SOD）和谷胱甘肽（GSH）水平降低（P<0.01），丙二醛（MDA）水平升高（P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组比较，牙周炎组大鼠肾组织中TNF-α和NF-κB p65蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR和免疫组织化学法检测，与对照组比较，牙周炎组大鼠肾组织中SIRT1和PGC-1α mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 慢性牙周炎模型大鼠肾组织中SIRT1表达下调，氧化应激水平升高，加重了慢性牙周炎大鼠肾组织损伤。

目的 基于核因子E2相关因子2（Nrf2）依赖的抗氧化途径探讨增龄后肌肉组织抗氧化应激特点，阐明活性氧（ROS）生成和抗氧化间的动态平衡在增龄性肌肉减少症（肌少症）中的作用。 方法 24只C57BL/6J（C57）雄性小鼠随机分为3月龄组（3 M组）、12月龄组（12 M组）和22月龄组（22 M组），取小鼠比目鱼肌组织，计算骨骼肌质量指数（SMI），HE染色观察各组小鼠肌肉组织病理形态表现，2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测各组小鼠肌肉组织中ROS水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠肌肉组织中过氧化物酶体增殖子活化受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、Nrf2和抗氧化应激基因mRNA表达水平，Western blotting法检测各组小鼠肌肉组织中Nrf2蛋白表达水平。 结果 与3 M组比较，12 M组小鼠比目鱼肌肌纤维横截面积增大，部分肌纤维细胞核数量增多，部分肌纤维可见变性改变，SMI值降低，但差异均无统计学意义（P>0.05），肌肉组织中ROS水平升高（P<0.05），Nrf2 mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05），PGC-1α mRNA表达水平明显升高（P<0.01），Nqol、Cat、Gclc、Sod1和Sod2 mRNA表达水平明显升高（P<0.01），Nrf2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；与12 M组比较，22 M组小鼠比目鱼肌白色肌纤维增多，形态不规则，肌纤维细胞核数量增多并出现核内移现象，肌细胞间隙增大，细胞数量减少，SMI值降低，但差异无统计学意义（P>0.05），肌肉组织中ROS水平明显升高（P<0.01），Nrf2 mRNA表达水平明显升高（P<0.01），Nqol、Cat、Sod1和Sod2 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01），而Gclc mRNA表达水平降低（P<0.05），Nrf2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。 结论 增龄性小鼠比目鱼肌表现为肌少症表型，以氧化代谢为主的比目鱼肌具有一定的抗氧化应激能力，与Nrf2依赖的抗氧化途径增强有密切关联。

目的 探讨北五味子多糖（SCP）对体外培养人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响，并阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养人膀胱癌T24细胞，分为对照组和50、100及200 mg·L^－1 SCP组。不同剂量SCP干预24~48 h后，采用MTT法检测各组T24细胞增殖抑制率，Hoechst 33258荧光染色法检测各组T24细胞凋亡情况，Annexin Ⅴ-FITC/碘化丙啶（PI）双染法检测各组T24细胞凋亡率，流式细胞术检测各组T24细胞不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率，Western blotting法检测各组T24细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）；T24细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）；50、100和200 mg·L^－1 SCP组 T24细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01），100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞S期和G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.01）；50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞中PTEN蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01），p-PI3K蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值明显降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 SCP 能够抑制T24细胞增殖，促进其凋亡，其机制可能与调控PTEN和PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。

目的 基于多重PCR技术，建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法，并评价其效能。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA，以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因，采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物，优化反应体系。建立三重PCR检测体系，并检测其特异性、灵敏度和稳定性。 结果 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA，浓度为227 mg·L^－1，纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因，于退火温度56 ℃时，蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp，基因引物cytK191的扩增片段为191 bp，基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮，且无非特异性条带，与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增，表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强；3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测，多重PCR体系最低检测限可同时达到10^－1 mg·L^－1；稳定性检测，多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。 结论 建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强，检测结果准确稳定，检测体系具有良好稳定性，适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。

目的 探讨正常或高胰岛素血症情况下卵巢切除对小鼠血糖、脂肪组织含量和肝脏脂质沉积的影响。 方法 6周龄雌性骨骼肌特异性胰岛素样生长因子1受体功能缺失（MKR）高胰岛素血症小鼠20只随机分为MKR假手术组（MKR组）和MKR卵巢切除组（MKR OVX组），每组10只；野生型（WT）FVB/N小鼠20只随机分为WT假手术组（WT组）和WT卵巢切除组（WT OVX组），每组10只。术后恢复饲养2周，监测各组小鼠体质量和血糖水平；葡萄糖耐量试验（GTT）和胰岛素耐量试验（ITT）检测小鼠葡萄糖耐受能力和胰岛素敏感性；术后12周处死小鼠，称量各组小鼠肝脏和脂肪组织质量，HE染色、糖原染色和油红O染色观察各组小鼠肝脏和性腺脂肪组织病理形态表现，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠性腺脂肪组织中脂代谢相关基因mRNA表达水平，Western blotting法检测各组小鼠性腺脂肪组织中激素敏感脂肪酶（HSL）蛋白表达水平。 结果 与WT组比较，MKR组小鼠体质量明显降低（P<0.05）；与MKR组比较，MKR OVX组小鼠体质量明显增加（P<0.05），但与WT组和WT OVX组比较，MKR OVX组小鼠体质量降低（P<0.05）。MKR OVX组小鼠血糖逐渐升高，出现严重葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。与WT组比较，WT OVX组小鼠肝脏出现脂肪变性，糖原减少，MKR OVX组小鼠肝脂肪变性程度增加且糖原减少。与WT组比较，WT OVX组小鼠性腺脂肪和肠系膜脂肪系数明显升高（P<0.05）；与MKR组比较，MKR OVX组小鼠皮下脂肪、性腺脂肪和肾周脂肪系数明显升高（P<0.05）。HE染色，与WT组比较，MKR组小鼠脂肪细胞明显缩小，WT OVX组和MKR OVX组小鼠脂肪细胞均增大，但与WT组和WT OVX组比较， MKR OVX组小鼠脂肪细胞仍缩小。RT-qPCR和Western blotting法检测，与WT组比较，MKR组小鼠性腺脂肪组织中HSL mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）；与MKR组比较，MKR OVX组小鼠性腺脂肪组织中HSL mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。 结论 卵巢切除会导致小鼠糖代谢紊乱、脂肪组织质量增加和肝脏脂质沉积，而高内源性胰岛素水平和胰岛素抵抗会进一步加重因卵巢切除导致的糖脂代谢紊乱。

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因，探讨其对胃癌细胞自噬的作用，并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组，分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较，过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较，过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较，过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01），BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05），SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较，过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05），p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。

目的 探讨苍术挥发油和苍术醇提物对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）的改善作用，为苍术的临床用药提供实验依据。 方法 40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、苍术挥发油（0.185 g·kg^－1）组、苍术醇提物（1.107 g·kg^－1）组和柳氮磺吡啶（0.250 g·kg^－1）组，每组8只。采用自由饮用3.5%DSS溶液建立UC小鼠模型。检测各组小鼠体质量和疾病活动指数（DAI）评分，解剖小鼠后检测各组小鼠结肠长度并计算脾脏系数，采用髓过氧化物酶（MPO）试剂盒检测各组小鼠结肠组织中MPO活性，HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态表现，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6） mRNA表达水平，免疫组织化学染色检测各组小鼠结肠组织中炎症因子阳性表达情况，阿利新蓝-过碘酸-雪夫（AB-PAS）染色观察各组小鼠结肠组织中杯状细胞数。 结果 与正常组比较，模型组小鼠第 7和8天时体质量降低（P<0.05），第4~8天时DAI评分升高（P<0.05），结肠长度缩短（P<0.05），脾脏系数增大（P<0.05），结肠组织中MPO活性升高（P<0.05），结肠组织损伤严重，结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平升高（P<0.05），炎症因子阳性表达增加，杯状细胞数减少。与模型组比较，苍术挥发油组、苍术醇提物组和柳氮磺吡啶组小鼠第7和8天时体质量升高，但差异无统计学意义（P>0.05），第6~8天时DAI评分降低（P<0.05），结肠长度增加（P<0.05），脾脏系数减小（P<0.05），结肠组织中MPO活性降低（P<0.05），结肠组织损伤程度减轻，结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平降低（P<0.05），炎症因子阳性表达减少，杯状细胞数增多。与苍术挥发油组比较，苍术醇提物组小鼠结肠组织中MPO活性降低，但差异无统计学意义（P>0.05）；TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平降低（P<0.05），杯状细胞数增多。 结论 苍术挥发油和苍术醇提物对UC模型小鼠均有改善作用，同等剂量下，苍术醇提物对小鼠UC的改善作用更好。

目的 探讨Toll样受体3（TLR3）激活对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植治疗狼疮性肾炎（LN）的效果，并初步阐明其作用机制。 方法 培养hUC-MSCs并鉴定，10 mg·L^－1聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组，另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组；小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后，每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平；8周后采血并取肾组织，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中抗双链DNA（dsDNA）抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF?α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现，免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关蛋白表达水平。 结果 hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较，模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高（P<0.05），肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05），肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象，肾组织中IgG和C3沉积明显（P<0.05），肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05），而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和酵母ATG6的同系物（Beclin1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较，给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低（P<0.05），6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低（P<0.05），血清中抗dsDNA抗体水平降低（P<0.05），肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05），肾组织病变有一定程度的改善，肾组织中IgG和C3沉积减少（P<0.05），且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显；hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05），LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与hUC-MSCs组比较，TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用，可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）27对环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤的作用，阐明其可能机制。 方法 60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、PACAP27组和左卡尼汀组，每组15只；除对照组外，其余各组大鼠采用环磷酰胺造模并给药。给药结束后第3天，称量大鼠体质量和睾丸质量，计算睾丸指数；采用放射免疫法检测各组大鼠血清中促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）和睾酮（T）水平，HE染色观察各组大鼠睾丸组织病理形态表现，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）水平，TUNEL染色检测各组大鼠睾丸组织细胞凋亡率，Western blotting法检测各组大鼠睾丸组织中线粒体凋亡途径相关蛋白表达水平；提取睾丸组织线粒体，采用线粒体分离试剂检测各组大鼠睾丸组织中线粒体膜通透性转换孔（mPTP）开放程度，JC-1荧光染色检测各组大鼠睾丸组织线粒体膜电位。 结果 与对照组比较，模型组大鼠体质量、睾丸质量和睾丸指数均降低（P<0.05），血清中FSH、LH和T水平降低（P<0.05），睾丸组织中SOD和CAT活性降低（P<0.05），MDA水平升高（P<0.05），睾丸组织发生明显病理损伤，细胞凋亡率升高（P<0.05），睾丸组织中细胞色素C（Cyt C）、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（caspase-9）蛋白表达水平升高（P<0.05），B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）蛋白表达水平降低（P<0.05），mPTP开放程度增强（P<0.05），线粒体膜电位降低（P<0.05）。与模型组比较，PACAP27组和左卡尼汀组大鼠睾丸质量和睾丸指数均升高（P<0.05），血清中FSH、LH和T水平升高（P<0.05），睾丸组织中SOD和CAT活性升高（P<0.05），MDA水平降低（P<0.05），睾丸组织病理损伤得到改善，细胞凋亡率降低（P<0.05），睾丸组织中Cyt C、Bax、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平降低（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05），mPTP开放程度降低（P<0.05），线粒体膜电位升高（P<0.05）。 结论 PACAP27可能通过抑制线粒体依赖性细胞凋亡途径减轻环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤。

目的 探讨不同浓度靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌（ NSCLC）A549细胞增殖、凋亡和分化的影响，阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养A549细胞，分为对照组（0 μmol·L^－1 E804）和不同浓度（2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1）E804组。采用MTT法检测各组细胞增殖率，细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力，软琼脂克隆实验观察各组细胞分化及克隆形成能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白和Janus 激酶1（JAK1）/信号转导与转录激因活子3（STAT3）信号通路相关蛋白表达水平。 结果 MTT法，与对照组比较，2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01），并呈时间和浓度依赖性。细胞划痕和软琼脂克隆法，与对照组比较，2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞迁移距离和克隆形成数减少（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测，与对照组比较，2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组比较，2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、磷酸化JAK1（p-JAK1）和磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01），Bcl-2相关X蛋白（Bax）、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）和裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved caspase-9）蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。 结论 E804可抑制A549细胞体外增殖、迁移和分化，并诱导其凋亡，其机制可能与下调JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达有关。

目的 探讨促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH-ant）方案和GnRH激动剂（GnRH-a）长方案在同一不孕患者中新鲜胚胎移植的妊娠结局，为促排卵方案的选择提供依据。 方法 采用回顾性研究方法，收集2年内接受GnRH-ant方案和GnRH-a长方案促排卵助孕治疗的74例不孕患者（共148个周期）的临床资料和实验室检查资料，分析2种促排卵方案的促排卵效果、胚胎发育情况和新鲜周期移植的临床结局。 结果 促排卵情况，与GnRH-a组比较，GnRH-ant组患者促性腺激素（Gn）总用量、使用天数和内膜厚度均降低（P<0.05或P<0.01）；血清中人绒毛膜促性腺激素（HCG）日黄体生成素（LH）水平明显升高（P<0.01）；获卵数和HCG日血清中孕酮（P）及雌二醇（E2）水平差异无统计学意义（P>0.05）。胚胎情况，与GnRH-a组比较，GnRH-ant组患者2个原核（2PN）率、异常受精率、2PN卵裂率、可用囊胚形成率和优质囊胚形成率均升高，但差异无统计学意义（P>0.05）；GnRH-ant组患者优胚率和可利用胚胎率明显升高（P<0.05）。临床妊娠结局，2组患者移植胚胎数目、异位妊娠率、流产率、种植率和临床妊娠率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 GnRH-ant方案周期优胚率和可利用胚胎率高于GnRH-a长方案，Gn使用剂量更低且使用时间更短，可能是更适宜的促排卵方案。

目的 筛选囊性纤维化（CF）特异性相关基因，预测其靶基因，并探讨其作用机制。 方法 从基因表达汇编（GEO）数据库获取CF样本和正常对照样本的高通量芯片数据集GSE71799、GSE24206、GSE98925和GSE69764，并分为CF组和对照组。采用R软件limma包筛选CF组和对照组差异表达基因（DEGs），使用基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）对DEGs进行功能和通路富集分析，使用基因集富集分析（GSEA）获取DEGs显著富集的基因集，采用STRING数据库建立蛋白-蛋白互作（PPI）网络，采用Cytoscape软件可视化并筛选hub基因。 结果 GEO数据库获取并筛选共429个DEGs（|log2（FC）|>1，P<0.05），CF组中显著高表达DEGs 105个，对照组中显著高表达DEGs 324个。GO富集分析，DEGs主要富集于中性粒细胞介导的免疫、趋化因子活动和细胞黏附分子结合等方面；KEGG通路分析，DEGs主要富集于白细胞介素17（IL-17）信号通路（P<0.05）。GSEA分析，DEGs主要富集于信号通路翻译、核糖体RNA（rRNA）处理和线粒体翻译等相关基因集。STRING数据库和Cytoscape软件分析共筛选出基质金属蛋白酶9（MMP9）、C-X-C基序趋化因子配体2（CXCL2）、C-X-C基序趋化因子配体3（CXCL3）等35个hub基因，其中CXCL2和CXCL3 hub基因与DNA甲基化有关联。 结论 hub基因可能是CF中调节中性粒细胞免疫的关键基因，通过中性粒细胞介导的免疫和与免疫密切相关的IL-17信号通路相关基因失调可促进CF发生发展，CXCL2和CXCL3基因可能成为CF的DNA甲基化治疗的生物标志物。

目的 探讨辅助生殖技术 （ART）助孕妊娠后患者发生晚期自然流产的相关因素，阐明引起晚期自然流产的危险因素。 方法 采用回顾性分析研究方法，收集310例行ART助孕后妊娠患者的临床资料，根据患者妊娠结局不同分为足月产组（248例）和晚期流产组（62例）。记录2组患者一般情况、不孕症发病主要原因及相关因素、临床情况和妊娠结局情况，并将单因素回归分析中P<0.05的因素纳入多因素Logistic回归方程，进一步分析患者晚期流产的危险因素。 结果 2组患者既往晚期流产或早产次数、既往宫颈LEEP或锥切史、既往宫腔镜下电切史、多囊卵巢综合征（PCOS）病史、体质量指数（BMI）、周期类型、内膜厚度、是否双胎妊娠和排卵障碍比较差异有统计学意义（P<0.05）。将P<0.05的因素纳入多因素Logistic回归方程， BMI（OR=1.194，95%CI：1.088－1.311，P<0.01）、既往有晚期流产或早产史（OR=5.673，95%CI：1.189－27.069，P=0.029）、宫颈LEEP或锥切史（OR=5.113，95%CI：1.025－25.496，P=0.047）和双胎妊娠（OR=5.129，95%CI：2.377－11.067，P<0.01）是晚期自然流产的危险因素；与新鲜移植周期比较，冻融胚胎移植（FET）周期（OR=0.422，95%CI：0.219－0.814，P=0.010）是晚期流产的保护因素。 结论 既往早产或晚期流产史、宫颈手术、高BMI和双胎妊娠是ART助孕妊娠后晚期自然流产的危险因素，而FET是晚期自然流产的保护因素。

目的 探讨右美托咪定持续输注对择期行肿瘤细胞减灭术（CRS）联合腹腔热灌注化疗术（HIPEC）腹膜癌患者围术期应激反应、乳酸（Lac）清除率和术后康复的影响。 方法 收集60例全身麻醉下行CRS联合HIPEC腹膜癌患者的临床资料，筛选后剔除4例患者，分为对照组（常规麻醉）27例和右美托咪定组29例。所有患者常规全身麻醉，右美托咪定组患者同时给予右美托咪定；术中监测有创动脉压（ABP）和中心静脉压（CVP），测定心脏指数（CI），计算心率血压乘积（RPP），术中以每搏变异度（SVV）指导补液。记录手术前（T0）、HIPEC开始前（T1）、HIPEC结束后（T2）和手术结束后（T3）时平均动脉压（MAP）、心率（HR）、RPP、CVP及CI和血中Lac、碱剩余（BE）、血糖（Glu）和皮质醇水平，计算Lac清除率；记录2组患者术后3 d内并发症发生情况。 结果 循环相关指标，在T0时2组患者MAP、HR、RPP、CVP和CI比较差异无统计学意义（P>0.05）；在T1时，与对照组比较，右美托咪定组患者RPP减少（P<0.05）；在T2时，与对照组比较，右美托咪定组患者HR和CVP均明显降低（P<0.05），RPP减少（P<0.05）；在T3时，与对照组比较，右美托咪定组患者HR、MAP和CVP明显降低（P<0.05），RPP减少（P<0.05），2组患者CI比较差异无统计学意义（P>0.05）。血气及应激相关指标，在T0时，2组患者血中Lac、BE、Glu和皮质醇水平比较差异无统计学意义（P>0.05）；在T1和T2时，与对照组比较，右美托咪定组患者血中Lac、Glu和皮质醇水平降低（P<0.05），BE负值减少（P<0.05）。术后Lac水平和肝肾功能，在术后12 h（T4）、术后24 h（T5）、术后48 h（T6）和术后72 h（T7）时，与对照组比较，右美托咪定组患者Lac水平降低（P<0.05），Lac清除率明显升高（P<0.05）；T5和T7时右美托咪定组患者丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平明显降低（P<0.05）。术后并发症发生情况，与对照组比较，术后3 d内右美托咪定组患者术后低血压、恶心呕吐、腹胀、寒战和睡眠障碍发生例数明显减少（P<0.05）。 结论 术中右美托咪定持续输注可降低腹膜癌患者围术期应激反应和Lac水平，减少术后并发症发生，促进患者术后康复。

目的 观察妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘组织中Apelin和其受体血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（APJ）表达情况，探讨其对滋养层细胞胰岛素抵抗（IR）、增殖和侵袭能力的影响。 方法 收集GDM患者（GDM组，30例）和糖耐量正常（NGT）孕产妇（NGT组，30例）胎盘组织。采用免疫组织化学法检测2组研究对象胎盘组织中Apelin和APJ阳性表达率，Western blotting法检测胎盘组织中Apelin和APJ蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胎盘组织中Apelin、APJ和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）mRNA表达水平，Pearson相关分析法分析Apelin和APJ mRNA表达水平与AMPK mRNA表达水平的相关性。体外培养滋养层细胞HTR-8/SVneo（HTR-8），分为对照组、Apelin组、高糖组（HG组）、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组；采用Western blotting法检测各组细胞中Apelin、APJ和胰岛素信号传递中胰岛素受体底物1（IRS1）、胰岛素受体底物2（IRS2）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）蛋白表达水平及磷脂酰肌醇3-激酶蛋白磷酸化（p-PI3K/PI3K）和AMPK蛋白磷酸化（p-AMPK/AMPK）水平，5-溴-2-脱氧尿嘧啶（EdU）试剂盒检测各组细胞EdU阳性表达率，Transwell小室实验检测各组侵袭细胞数。 结果 Apelin和APJ在胎盘绒毛组织中广泛表达；与NGT组比较，GDM组患者胎盘组织中Apelin和APJ mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。相关性分析，GDM组患者胎盘组织中Apelin和APJ mRNA表达水平与AMPK mRNA表达水平呈正相关关系（R²=0.148，P<0.05；R²=0.275， P<0.05）。Western blooting法检测，与对照组比较，Apelin组细胞中Apelin、APJ、IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值明显升高（P<0.05），HG组、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组细胞中Apelin、APJ、IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值均明显降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+Apelin组细胞中IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值明显升高（P<0.05），HG+Apelin+anti-APJ组细胞中上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。EdU和Transwell小室实验，与对照组比较，Apelin组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数明显升高（P<0.05），HG组、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数均明显降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+Apelin组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05），HG+Apelin+anti-APJ组上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 Apelin和APJ在GDM患者胎盘组织中表达降低，外源性给予Apelin后可改善滋养层细胞IR，并促进HG环境下的滋养层细胞增殖和侵袭能力，其机制可能与Apelin上调AMPK信号通路蛋白表达有关。

目的 探讨子痫前期（PE）患者胎盘组织中长链非编码RNA胃癌高表达转录本1（lncRNA GHET1）的表达及其对滋养层细胞增殖、细胞周期进展和侵袭能力的影响，并阐明其作用机制。 方法 30名孕产妇分为正常孕产妇组（正常组）15例和PE孕产妇组（PE组）15例，HE染色观察2组研究对象胎盘组织病理形态表现。体外培养滋养层HTR-8细胞，转染过表达lncRNA GHET1及对照序列质粒，并将滋养层细胞分为对照组（常规培养）、GHET1组（转染过表达lncRNA GHET1质粒）和阴性对照组（转染阴性对照序列质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组研究对象胎盘组织和各组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平，CCK-8法检测各组HTR-8细胞增殖率，流式细胞术检测各组不同细胞周期HTR-8细胞百分率，Transwell小室实验检测各组HTR-8细胞侵袭能力，Western blotting法检测各组HTR-8细胞中细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因（c-Myc）、细胞周期素D1（cyclinD1）、上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达 水平及Wnt/β-catenin信号通路中磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK3β）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）比值和β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达水平。 结果 与正常组比较，PE组患者胎盘组织绒毛发育不良，数量减少，绒毛内及间质血管分布紊乱，血管壁出现纤维素样坏死，钙化区域及绒毛上合体结节增加。与正常组比较，PE组患者胎盘组织中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较，GHET1组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05），阴性对照组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，GHET1组HTR-8细胞增殖率、S期细胞百分率和侵袭细胞数明显升高（P<0.05），阴性对照组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，GHET1组HTR-8细胞中c-Myc、cyclinD1、Vimentin和β-catenin蛋白表达水平及p-GSK3β/GSK3β比值均明显升高（P<0.05），E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05），阴性对照组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 过表达lncRNA GHET1可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞增殖、细胞周期进展和细胞侵袭，发挥改善PE进展的作用。

目的 基于核酸试纸条技术，建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA，以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因，采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物，建立并组装核酸试纸条，评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。 结果 蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg?L^－1，纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对，与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下，每100 μL 胶体金溶液加入3.3 μg链霉亲和素浓度标记，质控线浓度为1.8 g?L^－1，检测线浓度为1 g?L^－1时，硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条，PCR产物6 μL，样品展开液100 μL，检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致，仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果，与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应，为阴性结果；灵敏度检测，核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^－3 mg?L^－1仍可准确检测，普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10^－1 mg?L^－1出现目的条带，核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍；稳定性检测，核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。 结论 建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性，适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。

目的 构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白（TIGIT-GFP）慢病毒表达载体，建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系，探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。 方法 将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切，凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组，转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组，转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养，采用嘌呤霉素筛选2周后，挑取单克隆扩大培养，荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况，Western blotting 法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。 结果 酶切鉴定，TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体，DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测，实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。 结论 成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体，建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系，TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达。

还原态氧化铈（CeO₂）（Ce⁴⁺）/氧化态Ce₂O₃（Ce³⁺）氧化还原循环使氧化铈纳米颗粒（CeO₂-NPs）具有超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）等多种酶活性。CeO₂-NPs可通过酶活性清除自由基，发挥抗氧化的作用，激活转化生长因子β（TGF-β）/骨形态发生蛋白（BMP）信号通路。通过调控CeO₂-NPs表面Ce价态的比值，清除活性氧（ROS），创建成骨微环境。触发细胞内过量ROS产生诱导氧化应激，导致膜损伤进而抵抗病原菌，发挥抗菌作用。现结合国内外研究最新成果，对CeO₂-NPs在成骨细胞分化和相关致病菌抗菌中的作用及其可能机制进行综述，旨在为CeO₂-NPs促成骨和抗菌作用研究提供新思路。

黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体（LHCGR）主要表达于女性卵巢膜细胞和颗粒细胞中，是与多囊卵巢综合征（PCOS）发生发展及临床表现有密切关联的基因。LHCGR参与卵泡发育、排卵和黄体形成，其基因多态性与PCOS患者排卵障碍、雄激素分泌增多、促性腺激素比值异常、胰岛素抵抗、卵巢过度刺激及体质量指数（BMI）等有关联。LHCGR单核苷酸多态性（SNPs）主要包括LHCGR基因上rs13405728、rs2293275、rs7371084、rs4953616、rs4539842和rs61996318位点，在预测PCOS发病风险、诊断疾病类型和评估患者体外受精-胚胎移植（IVF-ET）成功率方面有潜在的应用前景。现就LHCGR基因多态性与PCOS发病风险、种族差异和临床表型特征等关联性方面进行综述，探讨LHCGR不同SNPs与PCOS临床表现的关联性及其应用价值，辅助临床对PCOS发病风险的评估，从而为制定个体化的精准医疗方案提供依据。

Twin-Block矫治器是用于生长发育期骨性Ⅱ类下颌后缩患者治疗的传统功能性矫治器，最初由以45°互锁的上、下2个咬合垫组成。近年来对于Twin-Block矫治器的改良主要集中在咬合垫交界区、下切牙区及粘接性等方面，应用该矫治器进行矫治的时机也成为正畸界争议的热点。Twin-Block矫治器能在有效促进下颌生长的同时改善侧貌，引起颞下颌关节的适应性改建。对于气道狭窄的患者，Twin-Block矫治器能够扩宽患者的上气道，实现呼吸功能的改善，同时有助于改善颈部姿势，使头颈部姿势变直立。Twin-Block矫治器与其他用于生长发育期骨性Ⅱ类下颌后缩的传统矫治器及新兴的MRC肌功能训练器和无托槽隐形MA矫治器比较也显示出良好效果。现结合国内外最新研究成果，从Twin-Block矫治器的组成、改良历程、矫治时机、治疗效果及其与其他功能性矫治器比较等方面阐述Twin-Block矫治器在正畸治疗中的应用，为充分发挥Twin-Block矫治器的作用和骨性Ⅱ类下颌后缩患者的治疗思路提供依据。

在矫正近视性屈光不正的术式中，后房型有晶状体眼人工晶状体（ICL）植入术因其安全、稳定和可逆等优点被广泛认可。ICL术后拱高为ICL光学区后表面中央到晶状体前顶点的垂直距离，是ICL术后最重要的安全性指标之一，也是ICL术后随访必不可少的项目。拱高过高或过低均可能引起相应并发症，影响术后临床效果。如何在术前选择合适的ICL型号并预判术后拱高及影响术后拱高的因素等问题已经成为研究热点。现就ICL植入术后拱高的理想值、ICL术后拱高变化趋势和原因及ICL术后拱高的影响因素进行简要综述，以期为术前选择合适的ICL型号和术后获得理想的拱高提供理论依据和参考。