Abstract:

目的：应用反义寡核苷酸（ASODN）技术靶向抑制生存素（survivin）基因，研究其对肝癌 SMMC-7721细胞凋亡的影响，阐明survivin反义寡核苷酸（survivin-ASODN）促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成survivin-ASODN序列（FAM荧光素标记）。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600 nmol?L-1 survivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组)，并设空白对照组、空脂质体对照组 和正义寡核苷酸（SODN）对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC-7721细胞24、48和72 h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期；Western blotting法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较，荧光素标记的ASODN转染SMMC-7721细胞24 h后，细胞生长开始受到抑制，细胞凋亡率增加，呈现剂量-时间依赖性（P<0.05）；作用48 h后，ASODN转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，G0/G1期细胞明显减少（P<0.05），G2/M期细胞显著增加（P<0.05），细胞被阻滞于G2/M期。与各对照组比较，不同浓度ASODN转染组SMMC-7721细胞survivin蛋白表达水平下降（P<0.05），且随作用时间的延长而降低（P< 0.05）。结论：survivin-ASODN通过抑制survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡，并且呈现时间-剂量依赖性。

Key words: 生存素, 反义寡核苷酸, 肝细胞癌, 流式细胞术, 转染