吉林大学学报(理学版) ›› 2019, Vol. 57 ›› Issue (5): 1267-1274.
高云娜, 韩彩静, 詹冬玲, 方丽, 闵伟红
GAO Yunna, HAN Caijing, ZHAN Dongling, FANG Li, MIN Weihong
摘要: 为构建高酶活力天冬氨酸激酶(aspartokinase, AK), 并削弱或解除Lys(lysine)反馈抑制作用突变体, 通过定点突变和高通量筛选技术构建突变体M372I,T379S和M372I-T379S, 对野生型(WT)和突变体分别进行诱导表达、 纯化及酶学性质表征. 结果表明: 突变体M372I,T379S和M372I-T379S AK与WTAK相比, Vmax分别提高了13.77,15.02,15.60倍, Km和n值均降低; 最适pH值分别升高为8.0,8.5,8.5, 且半衰期分别延长了1.0,0.9,2.3 h; M372I-T379S AK最适温度为30 ℃, 比WT AK高2 ℃; 当浓度为1~10 mmol/L时, 突变体均削弱或部分解除了抑制剂Lys的反馈抑制作用.
中图分类号: