吉林大学学报(医学版) ›› 2022, Vol. 48 ›› Issue (3): 773-782.doi: 10.13481/j.1671-587X.20220327
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潘延斌1,苏家光2,谭美乐1,杨猛1,覃文飞1,黄榆秀1,蒙世豪1,黄耀辉1,梁坚强1,苏雪芳1,黄姿婵1,李建民1()
Yanbin PAN1,Jiaguang SU2,Meile TAN1,Meng YANG1,Wenfei TAN1,Yuxiu HUANG1,Shihao MENG1,Yaohui HUANG1,Jianqiang LIANG1,Xuefang SU1,Zichan HUANG1,Jianmin LI1()
摘要: 探讨沉默DNA甲基化转移酶3a(DNMT3a)表达对银屑病样HaCaT细胞周期进展和细胞增殖的抑制作用,阐明其可能机制。 收集15例寻常性银屑病患者皮损组织(银屑病组)与15名健康者皮肤组织(对照组)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象皮肤组织中DNMT3a mRNA表达水平。siRNA转染技术将沉默DNMT3a表达的si-DNMT3a转染至HaCaT细胞中,RT-qPCR和Western blotting法检测si-DNMT3a的转染效率。采用M5方法诱导HaCaT细胞并建立银屑病样细胞模型,将细胞分为对照组、si-DNMT3a组、si-NC组和HaCaT组。CCK-8法检测各组细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Annexin Ⅴ-FITC实验检测各组细胞凋亡率。MSP实验检测银屑病组和对照组研究对象皮肤组织中LATS1基因启动子区甲基化水平。Western blotting法检测各组细胞中大肿瘤抑制基因1(LATS1)、Yes-相关蛋白1(YAP1)、Cyclin D1、CDK6和cleaved caspase-3蛋白表达水平。 与对照组比较,银屑病组患者皮肤组织中DNMT3a mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与HaCaT组比较,si-NC组HaCaT细胞中DNMT3a mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与HaCaT组比较,对照组、si-NC组和si-DNMT3a组HaCaT细胞增殖率和S期HaCaT细胞百分率均升高(P<0.05),G1期细胞百分率和细胞凋亡率均降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-DNMT3a组HaCaT细胞增殖率和S期HaCaT细胞百分率均降低(P<0.05),细胞凋亡率和G1期HaCaT细胞百分率升高(P<0.05)。MSP检测,银屑病组患者皮肤组织中LATS1启动子甲基化水平较对照组升高(P<0.01)。Western blotting检测,与HaCaT组比较,对照组、si-NC组和si-DNMT3a组HaCaT细胞中YAP1、Cyclin D1及CDK6蛋白表达水平明显升高(P<0.05),LATS1和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-DNMT3a组HaCaT细胞中YAP1、Cyclin D1和CDK6蛋白表达水平降低(P<0.05),LATS1和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。 沉默DNMT3a表达可能通过降低LATS1的甲基化水平并下调YAP1的表达,从而抑制银屑病样HaCaT细胞周期进展和细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡。
中图分类号: