家兔胆固醇酯转移蛋白基因克隆及其真核表达载体的构建
张 鹏1,2， 王艳丽3， 郭世文1， 刘恩岐3
- 1. 西安交通大学医学院第一附属医院神经外科，陕西 西安 710061；2. 西安医学院临床医学院，陕西 西安 710021；3. 西安交通大学医学院实验动物中心，陕西 西安 710061
Cloning of rabbit cholesteryl ester transfer protein gene andconstruction of its eukaryotic expression vector
ZHANG Peng 1,2,WANG Yan-li 3,GUO Shi-wen1,LIU En-qi3
- 1. Department of Neurosurgery,First Affiliated Hospital，College of Medical Sciences,Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061,China；2. School of Clinical Medicine，Xi’an Medical College,Xi’an 710021,China；3. Laboratory Animal Center, College of Medical Sciences,Xi’an
Jiaotong University，Xi’an 710061,China
摘要：
目的: 克隆家兔胆固醇酯转移蛋白(CETP) 基因，构建其真核表达载体，研究CETP基因的结构与功能，为进一步研究CETP在动脉粥样硬化(As)中的作用机制提供参考。方法: 采用TRIzol提取家兔肝组织总RNA，采用RT-PCR 方法将RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板，用LA Taq酶进行PCR扩增，克隆出CETP基因，将CETP cDNA片段克隆至pMD19-T载体上，对重组的CETP- pMD19-T测序后，登录GenBank进行序列比对，利用nnPredict软件分析预测CETP的二级结构。将CETP cDNA片段克隆至pcDNA3.1真核表达载体上，对重组质粒进行PCR及酶切鉴定。结果：测序及序列比对显示与M27486基因序列98%相符；家兔CETP基因cDNA全长1 659 bp，编码序列(CDs区)长1 494 bp，编码498个氨基酸。CETP的二级结构以α螺旋结构为主，相对分子质量为142119.4， pI为4.91。结论: 成功克隆了家兔CETP基因，并成功构建了其真核表达载体，明确了CETP的二级结构。
中图分类号:
