幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白包涵体的纯化及活性鉴定

doi:河南省医学科技创新人才工程项目资助课题，

幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白包涵体的纯化及活性鉴定

纪晋文，代丽萍，段广才^*，郗园林

郑州大学公共卫生学院流行病学教研室，河南郑州 450052

收稿日期:2004-10-28 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-03-28 发布日期:2005-03-28
通讯作者: 段广才

Purification and characterization of recombinant HspA-UreBfusion protein of Helicobacter pylori from inclusion body

JI Jin-wen, DAI Li-ping, DUAN Guang-cai^*, XI Yuan-lin

Department of Epidemiology, School of Public Health, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China

Received:2004-10-28 Revised:1900-01-01 Online:2005-03-28 Published:2005-03-28
Contact: DUAN Guang-cai

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立一种有效的纯化幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位-尿素酶B亚单位(HspA-UreB)融合蛋白包涵体的方法。方法：基因工程重组大肠杆菌BL21(pET-HU27)诱导表达的HspA-UreB融合蛋白包涵体经洗涤、变性、复性，在A¨KTA FPLC上运用HiTrap Chelating HP分离纯化，用SDS-PAGE和Bradford法检测目的蛋白的纯度和含量，用Western blotting对纯化后蛋白进行免疫学活性鉴定。结果：纯化后HspA-UreB融合蛋白的纯度＞90%，含量达0.25 g•L^-1，并可以被HspA-UreB融合蛋白免疫小鼠血清识别。结论：成功地建立了从包涵体中纯化高纯度HspA-UreB融合蛋白的方法。

关键词: 幽门, 热休克蛋白质类, 尿素酶, 重组融合蛋白质类, 包涵体, 蛋白质类, 分离和提化

Abstract: Objective To establish an effective method for purificating recombinant HspA-UreB fusion protein of Helicobacter pylori from inclusion body. Methods The inclusion bodies of HspA-UreB fusion proteins expressed in recombinant E.coli BL21（pET-HU27） were washed, denatured and renatured. The fusion proteins were isolated and purified by Ａ¨KTA Fast Protein Liquid Chromatogram（FPLC） with HiTrap Chelating HP, then the purity and content of target protein were detected by SDS-PAGE and Bradford method, and the immunocompetence was identified with Western blotting test. Results The recombinant HspA-UreB fusion protein from inclusion body was confirmed to have a purity and content of more than 90% and 0.25 g•L^-1, respectively, and a high immunocompetence. Conclusion An effective method for purificating recombinant HspA-UreB fusion protein of Helicobacter pylori from inclusion body is established successfully.

Key words: heat-shock proteins, urease, recombinant fusion proteins, inclusion bodies, proteins, separating and purification

中图分类号:

纪晋文，代丽萍，段广才，郗园林. 幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白包涵体的纯化及活性鉴定[J]. J4, 2005, 31(2): 256-258.

JI Jin-wen, DAI Li-ping, DUAN Guang-cai, XI Yuan-lin. Purification and characterization of recombinant HspA-UreBfusion protein of Helicobacter pylori from inclusion body[J]. J4, 2005, 31(2): 256-258.

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