摘要： 目的：获得人Flt3配体(FL) cDNA胞外段序列，构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法：提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列，构建重组质粒pGEM-FL，经酶切、PCR和测序鉴定后，将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30，构建重组表达质粒PQE30-rhFL，在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层 析方法纯化目的蛋白，Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白，并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果：经测序证实，获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol•L^-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白，镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带。结论：构建了原核表达载体PQE30-rhFL，并成功诱导了rhFL蛋白的表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。

关键词: 原核表达, 巢式聚合酶链反应, 遗传载体, 分离与提纯

中图分类号: 

• Q78